早期应激对海马学习、记忆功能的作用和机制研究

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1、第三军医大学博士学位论文早期应激对海马学习、记忆功能的作用和机制研究摘要背景早期应激与成年后行为的变化、对应激的生理响应的变化和对精神疾病的易感性有关。动物和人的研究都已证实脑在幼儿早期对应激尤其敏感。在此期间经历的应激事件可能会造成神经发育产生永久性的改变，而这些改变可能与成年时发生的精神疾病有关。母爱剥夺(maternaldeprivation,MD)是一个已经建立的成熟的早期应激动物模型，并被应用于与精神疾病病理和致病因素相关的神经化学研究。即使在对大多数成年应激源都没有显著响应的低应激反应期(SHI冲)，持续的母爱剥夺也

2、会产生十分不利的影响。海马的许多功能都可以被早期经历的恶性应激所改变。首先，海马参与HPA轴的负反馈调节。应激后造成的海马或穹窿的损伤可以导致HPA轴的基础调节功能恢复减慢。其次，海马是调节与焦虑相关的行为的重要结构。海马损伤的大鼠在行为测试中如对新环境的探索、社会接触等表现出较少的焦虑。再次，海马在空间导向学习能力方面发挥重要作用。海马的损伤就会对空间导向学习能力产生影响。早期经历母爱剥夺，异常的海马发育就可能导致上述情形的出现。目前关于母爱剥夺对海马结构和功能的作用机制缺乏详尽细致的研究，因而在许多方面没有明确的结论。本研究

3、在前期研究的基础上，特别考虑母爱剥夺的模式和实验动物性别等因素，从分子机制和神经行为学两个角度探讨母爱剥夺对海马的学习、记忆功能的作用和机制。目的1．观察母爱剥夺对雌雄大鼠海马神经发生的影响。2．观察不同模式的母爱剥夺对雌雄大鼠海马的Glucocorticoidsreceptors，Calretnin和CalbindinD。28k蛋白表达的影响。3．观察母爱剥夺对雌雄大鼠成年后对应激响应的影响。方法1)建立3种不同模式的SD大鼠的母爱剥夺模型：MD，在PND2．PNDl4(出生后第2天到第14天)期间，幼仔每日与母鼠分离3h(9

4、：00．12：00)；MD4，在PND4，幼仔与母亲分离24h(9：00．9：00)；MD9，在PND9，幼仔与母亲分离24h(9：00．9：00)。第三军医大学博士学位论文2)比较MD组和CON组(对照组)雌雄大鼠在PND21的体重。3)比较MD组和CON组(对照组)雌雄大鼠在PND21的海马的神经发生情况。对大鼠脑组织的冰冻切片进行免疫荧光染色，用ki67估测海马齿状回的细胞的增殖，用Doublecortin估测海马齿状回未成熟的神经元数目。4)对MD组和CON组(对照组)雌雄大鼠在PND21进行旷场测验，比较它们的探索行为

5、和自主活动性。5)采用westernblot和QT-PCR比较MD组、MD4组、MD9组和CON组的雌雄大鼠在PND21的海马的糖皮质激素受体(GR)的水平。6)采用westernblot和QT-PCR比较MD组、MD4组、MD9组和CON组的雌雄大鼠在PND21的海马的ealretinin蛋白和其mRNA的表达水平。7)采用westernblot和QT-PCR比较MD组、MD4组、MD9组和CON组的雌雄大鼠在PND21的海马的calbindin-D28k蛋白和其mRNA的表达水平。8)对MD组、MD4组、MD9组和CON组的

6、雌雄大鼠在PND21进行高架十字迷宫测验，检测它们的焦虑状况。9)对MD组和CON组(对照组)雌雄大鼠在PND25进行Morris水迷宫测验，比较它们的学习、记忆能力。10)在PND35，采用westernblot比较参加水迷宫测试的和未参加水迷宫测试的MD组和CON组的雌雄大鼠的海马的calretinin蛋白水平。11)在PND35，采用westernblot比较参加水迷宫测试的和未参加水迷宫测试的MD组和CON组的雌雄大鼠的海马的calbindin．D28k蛋白水平。结果1．雌性大鼠和雄性大鼠在出生后第2l天的体重并没有差别

7、。不论是雄性大鼠还是雌性大鼠，MD组的体重都极其显著低于对照组的pO．05)。雄性大鼠的MD组的较对照组的海马的细胞增殖减少(p<0．05)。而雌性大鼠的MD组和对照组之间的差别不具有统计学意义(p>O

8、．05)。4．在旷场测试中，雄性大鼠的总运动和总运动时间都显著高于雌性大鼠的(p<0．05)。对雄性大鼠来说，MD组的总运动距离和和总运动时间都显著低于对照组的(p0．05)。5．在PND21，雄性大鼠海马的CA