油茶内生拮抗细菌y13定殖动态及对叶内微生物调整效应研究

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1、ColonizationandAdjustedeffectofinoculatingwithAntagonisticStrainsY13onMicrobeinCamelliaoleiferabyWANGRuiqinAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencelnMicrobiologylnCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinD

2、istrictChangshaHunan410004，ER．CHINASupervisorProfessorZHOUGuoyingMay,2014中南林业科技大学学位论文原创性声明l恻剃磐攀螋本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果Eh本人承担。作者签名：王瑞苛w忤歹

3、月步日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：1、保密口，在——年解密后适用本授权书。2、不保密阢(请您在以上相应方框打“√")作者签名：王瑞；f导师签名：闸问孝词叶年5,El≯Et阳叩年岁月扣日摘要油茶炭疽病(Camelliaoleiferaanthracnose)是我国油茶产区的主要

4、病害之一，严重影响油茶质量和产量。本课题组从健康油茶叶片内分离筛选得到一株对油茶炭疽病具有较好防治效果的内生拮抗细菌Y13，经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。菌株Y13对油茶炭疽病病原菌有较强的拮抗作用，盆栽苗木病害防治实验效果好，，为了更好开发菌株Y13为生防菌剂，本论文研究Y13在油茶植株体内的定殖动态及其对油茶叶内微生物的调整效应，主要研究结果如下：(1)内生拮抗细菌Y13在油茶植株体内定殖动态研究。采用抗利福平诱导法，筛选出抗利福平浓度为300pg／mL的标记菌株Y13R，然后采用灌根法、喷雾法、注射法和刺伤叶片法四种接种

5、方法对油茶苗接种菌株Y13R，并于接种后不同时间段对油茶组织内Y13R菌株的定殖量进行检测，结果表明：标记菌株Y13R能通过自然孔口或伤口侵入油茶根茎叶内，并在油茶体内繁殖和传导。不同浓度的Y13R菌液均能在油茶体内定殖，但随着Y13R菌液浓度的增加，定殖时间逐渐延长，回收Y13K菌株数量也相应增加，Y13R菌液的最佳接种浓度为109cfu／mL，最佳接种方法为刺伤法。刺伤法接种Y13R菌液在油茶植株体内的定殖趋势为“先增后减最后趋于稳定”，接种20d后，Y13R菌株定殖量趋于稳定，最终定殖量为3．59×103cfu／g。(2)油茶健株与病株体内主要微生

6、物区系差异的研究。油茶健株与病株体内微生物区系主要由细菌和真菌两大类群组成，没有分离到放线菌。可培养内生细菌主要属于5个属的7个已知种，内生真菌主要属于9个属的7个已知种。油茶健株与病株不同组织内生菌的群落组成及优势菌类群有所不同。病株各组织内细菌的种类均多于健株，枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、球形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillussphaericus)和蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)为油茶健株与病株体内所共有的优势细菌；炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomona

7、sspp．)和克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)为病株特有的优势细菌。健株体内真菌的种类多于病株，尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、拟茎点霉属(Phomopsisspp．)、芒果球座菌(Guignardiamangiferae)和胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)为健株和病株所共有的优势真菌。油茶健株与病株叶片内细菌数量均显著高于真菌(P<0．05)。病株叶内细菌的数量是健株的1．12-26．63倍。健株叶片内真菌数量是病株的1．33,--2．40倍。对油茶健株与病株叶内微生物群落

8、的多样性和均匀性进行分析，结果表明健株叶内微生物群落多样性和均匀性程度均高于病株