多西他赛脂质纳米混悬剂的研究

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1、山东大学硕士学位论文多西他赛脂质纳米混悬剂的研究研究生：王丽丽导师：张娜教授中文摘要近年来恶性肿瘤的发病率和死亡率一直呈明显上升趋势，用于恶性肿瘤治疗的方法主要包括放射治疗、手术治疗和药物治疗，其中对于实体瘤和转移肿瘤的治疗，药物治疗占有重要地位，特别是肿瘤化疗取得了很大程度上的进步。多西他赛是目前广泛研究应用的一种新型紫杉烷类抗肿瘤药物fl】，其作用机制是通过刺激导管素的聚合，加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，导致形成稳定的非功能性微管束，因而破坏肿瘤细胞的有丝分裂【21。多西他赛在临床上被广泛地应用于卵巢

2、癌131、乳腺癌【41、非小细胞肺癌【51和其它【6】多种癌症的治疗。但多西他赛由于溶解度差、生物利用度低及毒性大等使其临床应用受到限制，目前I晦床应用的剂型仅为注射液，泰索帝@和多帕菲@，该注射剂含有大量非离子表面活性剂Tween-80。其中药物本身或吐温．80会引起严重的过敏反应如过敏反应，体液潴留，神经、骨骼肌肉毒性和中性粒细胞减少症等【7】，限制了其临床应用。因此，研究、探索新型高效、低毒药物给药系统成为药剂学研究热点之一。本课题旨在研发新的给药系统提高多西他赛的水溶性，避免吐温．80表面活性剂的使用，同时

3、选择合适的肿瘤靶向因子将抗癌药物专一性或选择性的输送到肿瘤组织，减少药物在正常组织器官的分布，降低其对正常组织器官的毒副作用，利于未来用于癌症的治疗。本研究课题首次制备三种不同类型的可生物降解的脂质纳米混悬剂：一、被动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂(DTX．1ipid．based．docetaxel．nanosuspensions，DTX．LNS)；二、长循环多西他赛脂质纳米混悬剂(pLNS)；三、叶酸介导的主动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂(tLNS)。本课题对这三种多西他赛脂质纳米混悬剂进行了系统的理化性质研究、药效学

4、评价，以及体内药代动力学行为和体内组织分布行为研究，研究内容与结果如下：山东大学硕士学位论文一、多西他赛脂质纳米混悬剂药物含量测定方法的建立采用高效液相色谱法测定多西他赛脂质纳米混悬剂中多西他赛的含量，并对方法学进行了研究。结果表明此方法简便快速、灵敏度高、专属性强，能准确测定多西他赛的含量。二、被动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂的研究采用高压均质法制备DTX-LNS，采用冷冻干燥法以甘露醇作为冻干保护剂制备DTX．LNS冻干制剂。使用透射电镜观察粒子外观形态，ZETASIZER3000激光粒度分布与电势分析仪考察其粒

5、径、粒径分布。采用透析袋法考察其体外释药行为。肿瘤细胞毒性研究中，以多西他赛市售注射液多帕菲@为对照组，采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定多帕菲@、DTX．LNS和Blank．LNS对卵巢癌细胞株(SK．ov-3)和小鼠黑色素瘤细胞株(B16)的细胞毒性作用。药效学研究中，进行TDTX．LNS与市售多帕菲啦射液对荷小鼠黑色素瘤(B16)昆明鼠的体内抗肿瘤效果的比较。试验结果显示在优化条件下采用高压均质法制备DTX．LNS，制得的纳米混悬剂粒子形态规整，平均粒径为200．04-3．42am，zeta电位为．11．154

6、-0．99mV，稳定性好。多帕菲@与DTX．LNS体外释药均符合一级动力学数学模型，释放曲线拟合方程分别为：DTX．LNS：ln(100．Q)=．O．1961t+4．5543，r=O．9946，多I怕菲@：In(100．Q)=．0．1859t+4．4038，r=0．9991．。多西他赛脂质纳米混悬剂的细胞毒性与多帕菲@注射液的细胞毒性相当。体内药效学研究结果表明，与多帕菲@，LNS作为抗肿瘤药物载体可通过被动靶向作用，使药物蓄积于肿瘤部位，增强药物的抗肿瘤作用同时降低药物对正常组织的毒副作用。采用高压匀质发制备的D

7、TX-LNS，可进行产业化生产，粒径小，体内抑瘤效果好，毒性低，是一种具有开发上市潜力的药物新剂型。三、长循环和主动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂的研究采用高压均质法以PEG修饰的脂质载体材料制得表面有PEG修饰的长循环脂质纳米混悬剂(pLNS)。利用叶酸上的羧基与DSPE．PEG上的氨基通过DCC反应制得DSPE．PEG．FA，将DSPE．PEG．FA掺入脂质载体材料中成功制备主动靶向脂质纳米混悬剂(tLNS)。使用透射电镜观察粒子外观形态，ZETASIZER3000激光粒度分布与电势分析仪考察其粒径、粒径分布。采用

8、透析袋法考察其体外释药行为。肿瘤细胞毒性研究中，采用噻唑蓝比色法(Mn'i去)研究多帕菲@、pLNS、tLNS、Blank-pLNS和Blank-tLNS对细胞表面低表达叶酸受体的肿瘤细胞人肝癌细胞株(H印G2)和细胞表14山东大学硕士学位论文面高表达叶酸受体的肿瘤细胞小鼠黑色素瘤细胞株(B16)fl懈胞毒性作用。药效学研究中，进行TpLNS、tLNS与市售