新型功能化磷酸蛋白富集材料合成与性能研究

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1、万方数据分类号：TS201．6密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：2011813028新型功能化磷酸蛋白富集材料合成与性能研究SynthesisandPerformanceofaNovelFunctionalMaterialonPhosphorylatedProteinErichment专业名称：．营养与食品卫生学指导教师姓名：王俊平教授研究生姓名：李明申请学位级别：医学硕士论文提交日期：2014年3月论文课题来源：国家科技部“863”计划学位授予单位：天津科技大学万方数据天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得

2、的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：劲f摹年刁月．；》日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名

3、第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。l作者签名：雹：碉日期：≯弘年孑月弓日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密lI(请在方框内打“√”)，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于作者签名：导师签名：不保密囱(请在方框内打c-√，，)。日期：7嘶年≥月刁日日期：劢7C胪F≥月≥

4、日万方数据主要符号表ABBREBIATION万方数据摘要蛋白质在生命活动中起着重要的作用，并且它是生命现象的直接体现者，在医学中研究生理或病理的机制也都是建立在蛋白质水平上的。与此同时，各种形式和行为活动的蛋白质，如翻译后修饰、蛋白质之间的相互作用以及表现形式都需要我们对蛋白质进行进一步研究。大多数的蛋白质在翻译后在不同的基团会发生不同的修饰，例如磷酸化修饰。蛋白质的选择性和可逆性磷酸化修饰在生命活动的调节机制过程中起到了比较重要的作用，体内中30．50％的蛋白质都有可能受到可逆性磷酸化修饰。在近些年，生物质谱已经取代一些传统的手段作为研究磷酸化的分析技术，但是由于磷酸化蛋白的多样性、磷酸化

5、位点自然存在时间短以及相对较低的丰度使得磷酸化位点很难检测到，因此开发一种更加有效分离和富集磷酸化蛋白质的方法是十分有必要的。本文是通过Stober法合成了单分散的二氧化硅微球，并通过衍生实验在二氧化硅微球上嫁接双键以形成二氧化硅材料的载体。另外，本实验又合成了阴离子受体名为1．(3，5．二三氟甲基．苯基)．3．(4．乙烯基苯基)脲的功能单体，并在交联剂N，N．亚甲基双丙烯酰胺以及引发剂引发作用下在二氧化硅载体表面修饰了一层聚合物，合成了一种能够对磷酸化蛋白质特异性吸附的新型硅球材料。通过傅里叶红外光谱、透射电子显微镜对新型硅球材料Si02@M2进行表征，结果显示新型硅球材料的直径大约为21

6、0．220rim，其表面修饰有功能单体的聚合物层的厚度约为10nm。然后以经典的磷酸化蛋白质D．酪蛋白为模式蛋白来考察新型硅球材料Si02@Mz对于磷酸化蛋白质的吸附性能。研究结果表明，新型硅球材料Si02@M2不仅对于D．酪蛋白这一种磷酸化蛋白质具有较高吸附容量(对p．酪蛋白的吸附容量为92mg／g)，而且对于其它两种磷酸化蛋白质Q-酪蛋白和鸡卵白蛋白OVA均具有良好的吸附容量(对Q-酪蛋白的吸附容量为40．2mg／g、对鸡卵白蛋白OVA的吸附容量为36．3mg／g)，均高于其它非磷酸化蛋白质的吸附容量(牛血清蛋白BSA的吸附容量为12．8mg／g、细胞色素C的吸附容量为6．28mg儋、牛

7、血红蛋白的吸附容量为3．8mg／g、溶菌酶的吸附容量为8．08mg／g)。通过SDS—PAGE蛋白质凝胶电泳技术可以反映出新型硅球材料Si02@M2对于磷酸化蛋白质具有良好的选择性，能够从多元蛋白体系中选择性富集磷酸化蛋白质，并且通过实际样品一脱脂牛奶中磷酸化蛋白质的选择性富集，实验结果表明，新型硅球材料Si02@M2对于样品中的磷酸化蛋白质也具有较好的选择性富集作用。关键词：磷酸化蛋白；阴离子受体；硅球材料