悬浮培养大豆细胞高产植物雌激素成分的研究

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1、厦门大学硕士学位论文悬浮培养大豆细胞高产植物雌激素成分的研究姓名：梁晓芳申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：朱学艺20070601悬浮培养大豆细胞高产植物雌激素成分的研究本文缩写词MJ：methyljasmonatePhe：PhenylalanineDMSO：DimethylsulfoxideS：sucroseJ1：J2：FDA：FlurosceindiacetateHPLC：Hi曲PerformanceLiquidChromatographydw：dryweightfw：freshweight茉

2、莉酸甲酯苯丙氨酸二甲亚砜蔗糖京豆1号京豆2号荧光素二乙酯高性能液体色谱干重鲜重厦门大学学位论文原创性声明兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文产生的权利和责任。声明人(签名)：』匕协考7叩年7月烨日厦门大学学位论文著作权使用声明本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦门大学有权保留并向国家主管部门或其指定机构送交论文的纸质版和电子版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论

3、文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保留的学位论文在解密后适用本规定。本学位论文属于／1、保密(硝，在▲年解密后适用本授权书。／2、不保密(＼／)(请在以上相应的括号内打“√”)作者签名：瑚翅澎鸣导师签名：日期：岬年-7月烨日日期：沙口7年7月垆日悬浮培养大豆细胞高产植物雌激素成分的研究摘要更年期的妇女，由于卵巢功能减弱，雌激素分泌不足，容易导致骨质疏松、心血管疾病等更年期综合症的发生。采用雌激素替代疗法可以缓解更年期综合症，雌激素通过调

4、节平滑肌张力和脂代谢降低心血管疾病的发生，对心血管系统有保护作用。然而，长期使用动物雌激素有较大的副作用，会增加患子宫内膜癌、乳腺癌的风险。近年来研究发现异黄酮等植物次生代谢物具有与雌二醇相类似的结构，能够与雌激素受体结合，表现出雌激素样作用，这类物质称为植物雌激素。和动物雌激素(主要为雌二醇)相比，植物雌激素对血管壁和生殖器官上的雌激素受体具有不同的选择性结合能力，所以对生殖系统的副作用较小，不但能够缓解妇女更年期综合症，而且会减少子宫内膜癌和乳腺癌的发病几率。这一领域的研究为人类寻觅有效而安全的雌激素

5、替代天然药物提供了新的线索和思路。异黄酮类物质大量存在于豆科植物及其产品中，但利用栽培资源植物提取该成分不仅需要占用大量耕地、植物生长周期较长，而且还要受地域和气候等多种环境因素的限制。利用植物细胞培养技术来生产植物代谢产物则可以克服上述限制，为人类获得天然物质提供一条新途径。本文运用组织培养技术，诱导了大豆愈伤组织，并建立了大豆悬浮细胞培养体系，从悬浮细胞中提取大豆异黄酮，有利于扩大植物雌激素的来源。同时我们研究了异黄酮合成前体物苯丙氨酸(Phenylalanine，Phe)、次生物质有效诱导子茉莉酸甲

6、酯(memyljasmonate，MJ)及蔗糖(Sucrose，s),n--甲亚砜(Dimethylsulfoxide，DMSO)对大豆悬浮细胞中异黄酮积累的影响。主要包括以下几个方面：1．大豆种子经消毒后，在培养基上萌发并长出无菌苗，取其下胚轴为外植体诱导愈伤组织。诱导条件为：MS+2，4一DO．8mg／L+琼脂O．8％，暗中培养，温度(25±11℃。可在15天诱导出愈伤组织，白色或淡黄色，继代培养后，建立了悬浮细胞系；以子叶为外植体，诱导愈伤组织，诱导条件为：MS+2，4．D5．0mg／L+琼脂O．8

7、％，暗中培养，温度(25±1)℃，可在第5天诱导出愈伤组织，块大、细胞松散、白色或淡黄色，继代培养后，可建立悬浮细胞系。2．培养基中加入BA不利于子叶愈伤组织的形成；以下胚轴诱导愈伤时，BA的存在导致愈伤组织坚硬，细胞致密，不利于形成悬浮细胞。3．以每克干重计算，愈伤组织和悬浮细胞中的异黄酮含量均高于种子中。种子悬浮培养人豆细胞高产植物雌激素成分的研究中总异黄酮含量为：1．55mg／g，悬浮细胞中总异黄酮含量为4．88mg／g，是种子的3．15倍。4．经筛选确定：有利于大豆悬浮细胞中总异黄酮积累的最佳培养

8、条件为：MS+2，4．DO．8mg／L，暗培养，转速120r／min。5．在对数生长期末期(第6天)JJn入DMSO，48h后收获细胞，有利于总异黄酮的积累，含量为7．54mg／g，是对照悬浮细胞总异黄酮含量的1．6倍，是种子总异黄酮含量的4．9倍；获取大豆素的最佳培养条件为：45∥L蔗糖作用于大豆素悬浮细胞72h；大豆悬浮细胞中加入10umol／L的苯丙氨酸不仅有利于大豆素积累，而且对染料木素的积累有一定作用，48h时处理组