小鼠胚胎着床前期longsage文库构建、验证及相关基因研究

《小鼠胚胎着床前期longsage文库构建、验证及相关基因研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所量交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研，究残果。据我所知，涂了文孛特别如汉标注和致谢的地方努，论文孛不包含其他人已缀发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构戆学位或证书蔼使用过的材料，与戏黧王作的蔑志对本研究所做妁任何贾献均巴在论文中作了明确的说蛾并表示谢意。孛请学位论文与资料著有不实之处，本人承担一切相关责经。学位论文作者签名—燮：日期：竺兰：邂学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位豢阕论文王佟戆每识产叔单位属熏

2、麦医科大学。本人鬻证毕韭离校髫，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向圜家有关部弱或枧携送交论文的复窜绎和磁盘，竞许论文被查溪和偿蔫。学棱哥汉公布学位论文的全部或部分内辑(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保毒论文。论文作者签名：指导教师签名：疆期：重庆疆斟大学硬士磷究生学位论文小鼠胚胎着床前期LongSAGE基因表达文库构建、验证及相关基因研究．▲上。—J“刖罱遗传基因作为各种生物最基本的“建设蓝鹭黟，决定着每个生物个体凡乎所有的生物学变化。研究清楚每一个基因的作用机制，对解释生命起源、保护濒危物种、控制人类

3、疾病、延长人类寿命等诸多方面都具有重大意义。随着研究技术手段的进步，人们已经不满足于把某一个特定分子与基因作为突破口去探寻某个生物学变化的发生机制，丽是使用大规模的基因表达谱同时研究多个基因，甚至是基因组。其中寡核营酸蕊片、DNA微阵列以及基因表达系列分析(SerialAnalysisofGeneExpression，SAGE)是目前应用最广泛的基因表达分析方法。SAGE技术相对于寡核营酸芯片、DNA微阵列更具优势：能较完整地获得基因组表达丰度的数量信息，大规模对转录本迸行定性和定量分析，可充分了解基因转录组的全貌，不仅熊检测已知基透，甚至还可以发现

4、新基因，被涯明是一种对全基因组基因进行表达分析和寻找差异表达基因的强有力工具。通过对转录本特定位置的短寡核营酸标签(即SAGE}摹签)的鉴定、分j!蓐可以获取基因表达豹信息。每种标签在全部标签中所占的比例可以反映它所代表的转录本在整个转录体系中的表达丰度。因此，SAGE技术可以黑来准确她对特定组织的基因表达进行定性稠定量分析。SAGE的一个优点是可以在懿体水平对细胞或组织中的大量转录本同时进行定量分析，秀无论其是委为已知基因。嚣焉，可以客涎、全西地反映基因转录组豹全貌。因此，我们采用SAGE技术构建小馘胚胎着床前期子宫内膜LongSAGE基嚣文瘴，并

5、与我嚣】已经构建的着床甥子富内膜LongSAGE基因文痒(我稍之翦完成的另～部分工作)进行定性和定量分析，获取二脊的差异表达基因，将有助于更深入地理解和认识题舱藿痣酶分子瓿理，麓时对艇床不孕瘥觞诊治以及探寻掰的生殖调控手段也具有重要的实践价值。8重庆医科大学硕士研究生学位论文第一章小鼠胚胎着床前期(d3)子宫内膜LongSAGE基因表达文库的构建基因表达系列分析技术(serialanalysisofgeneexpression，SAGE)是1995年蠢美国Joh／lsHopkins大学瓣瘤中心VetculescuVE等11l建立斡一辩薪的基因表达模式

6、研究技术，它可以在整体水平对细胞或组织中的大量转录本同时进行定性和定量分析，而无论蒸是否为西知基薮。该技术主要基于蕊个原理：首先，在一个转录体系中，每种转录本都可以用唯一一个特异的固定长度寡核营酸序列(9-14bp)来代表，这些短牟罗}j称为SAGE标签(SAGEtag)。扶人类基因缝计划酶结果来看，人类基因组编码的基因数目在28642"-"153478种之间，特定组织或细胞表达的基因数量则不超过15000种。以—-叁9bp的标签库为例，理论上爵以区分矿(262144)种转蒙本，已足够代表任何一种特定的组织或细胞的全部转录本。其次，SAGE标签经随机

7、连接、扩增并集中在一个克隆中测痔，并将得到酶短序列核营酸顺序以连续的数据形式进行处理，就能对数以千计的mRNA转录本进行分析，每种标签猩全部标签中所占的比侧可以反映它所代表的转录本在整个转录体系中的表达车度。因此，SAGE能够直接分析任何～种类型细胞或组织的基因表达信息，并对细胞或组织的表达基因进行定性与定量分析。由于初始建立的SAGE方案获褥的是14如的撼签，标签龅特异性较低，多重匹配标签较多，不便于进行后期的生物信息学分析，所以该肿瘤中心-1=2002年应用一种新发现的核酸内切酶Minel作为标签酶，使之获得的标签长度达到2lbp，大大提高了标签

8、的特异性，这季申改进后的SAGE称为LongSAGE。由予小鼠受孕率高，繁殖周期短，并且翻人类的辨发生、兹着