第十四章 临床化学常用分析技术

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1、第十四章 临床化学常用分析技术   本章考点  1.临床化学常用分析方法  光谱分析、电泳技术、离心技术、层析技术、电化学分析技术的基本原理和应用  2.临床化学方法的建立  (1)方法建立的根据  (2)方法建立的过程  (3)方法的评价  (4)方法建立后的临床观察第一节 临床化学常用分析方法  一、光谱分析(分光光度技术)  定义:  利用物质具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征,以此来确定物质性质、结构或含量的技术,称为光谱分析技术。  它具有灵敏、快速、简便等特点,是生物化学分析中最常用的分析技术。  分类:    (一)可见及紫外分光光度法  分光光度法的

2、理论基础是朗伯-比尔定律。  1.Lamber-Beer定律:  A=k·b·c  A为吸光度  k——吸光系数  b——光径,单位:cm。  c——溶液浓度,单位:g/L  在可见-紫外分光光度法中,通常在测定未知样品浓度的同时,与同一个已知浓度的标准物作比较,可以利用以下公式计算而求出其浓度,即比较法。    其中Cx和Ax为标本管浓度和吸光度,Cs和As分别为标准管浓度和吸光度。  2.摩尔吸光系数:在公式“A=k·b·c”中,当c=1mol/L,b=1cm时,则常数k可用ε表示称摩尔吸光系数。  ε的意义是:当液层厚度为1cm,物质浓度为1mol/L时在特定

3、波长下的吸光度值。  ε是物质的特征性常数。    不同物质的摩尔吸光系数不同  3.比吸光系数:在公式“A=k·b·c”中,当c为百分浓度(w/v),b为cm时,则常数k可用E%表示,称为比吸光系数或百分吸光系数。  (二)原子吸收分光光度法  根据待测元素的气态原子能吸收相同原子所发射的特定波长的光,其吸收特性遵循Lambert-Beer定律,即在一定条件下,原子的吸光度同原子蒸气中待测元素基态原子的浓度成正比。      第14页                        常用的定量方法有:  1.标准曲线法:  将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程

4、分别进行测定,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。在相同条件下处理待测物质并测定其吸光度,即可从标准曲线上找出对应的浓度。由于影响因素较多,每次实验都要重新制作标准曲线。  2.标准加入法:  把待测样本分成体积相同的若干份,分别加入不同量的标准品,然后测定各溶液的吸光度,以吸光度为纵坐标,标准品加入量为横坐标,绘制标准曲线,用直线外推法使工作曲线延长交横轴,找出组分的对应浓度。  本法的优点是能够更好地消除样品基质效应的影响。  3.内标法:  在系列标准品和未知样品中加入一定量样本中不存在的元素(内标元素),分别进行测定。以标准品与内标元素的比值为纵坐标

5、,标准品浓度为横坐标绘制标准曲线,再根据未知样品与内标元素的比值依曲线计算出未知样品的浓度。  本法要求内标元素应与待测元素有相近的物理和化学性质。只适用于双通道型原子吸收分光光度计。  (三)荧光分析法  有些物质物质受到有较高能量的光(如紫外光)照射时,在吸收了某些波长的光后,会发射出不同波长和不同强度的光(光致发光),照射停止,发光亦随之消失,这种光称为荧光。  利用荧光强度进行分析的方法,称为荧光法。  在荧光分析中,待测物质分子成为激发态时所吸收的光称为激发光,处于激发态的分子回到基态时所产生的荧光称为发射光。  荧光分析法测定的是受光激发后所发射的荧光强

6、弱。  在一定条件下,荧光物质的浓度愈大,发射的荧光强度也愈强。  (四)火焰光度法(火焰发射光谱法)  是待测元素利用火焰作为激发源,成为激发态原子回降至基态时发射的光谱强度进行含量分析的方法,属于原子发射光谱分析的一种。  样品中待测元素激发态原子的发射光强度I与该元素浓度C呈正比关系,即I=aC,式中a为常数,与样品组成、蒸发和激发过程有关。  火焰光度法通常采用的定量方法有标准曲线法、标准加入法和内标法。  临床工作中,火焰光度法主要用于体液中的钠、钾测定,钠的特征谱线为589nm(黄色),钾的特征谱线为767nm(深红色)。  (五)透射和散射光谱分析法 

7、 主要测定光线通过溶液混悬颗粒后的光吸收或光散射程度,常用法为比浊法,又可称为透射比浊法和散射比浊法。  临床上多用于对抗原或抗体的定量分析。  二、电泳分析  在直流电场中,带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。  常用的电泳分析方法:  1.醋酸纤维素薄膜电泳:  醋酸纤维素是指纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。  这种薄膜对蛋白质吸附小,能消除电泳中出现的“托尾”现象。  具有分离速度快、样品用量小的特点。适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。  2.凝胶电泳:      第14页              

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