skp2、p27在口腔疣状癌中的表达研究

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1、硕士学位论文刚舌受多种因素所调控，其中有两个主要调控点：一个处于G1／S转折点，是控制细胞进入S期的控制点(G1期检测点)，另一个处于G2／M转折点，是控制细胞进入M期的控制点(G2期检测点)。细胞周期蛋t刍(cyclin)和细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)复合物在细胞周期中具有重要的正性调节作用。而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin．dependentkinaseinhibitor，CDKI)贝3J起负调节作用，通过与cyclin．CDK形成稳定的复合物，抑制CDK催化活性，阻断细胞周期的运行。p27，又称为激酶

2、抑制蛋白(kinaseinhibitedprotein，KIP．1)，是一种细胞周期蛋白激酶抑制剂，能够抑制CDK，控制细胞周期G1／S的转换，引起G1期阻滞，进而影响细胞的增殖，抑制肿瘤生成【27之91。S期激酶相关蛋白(S．phasekinaseassociatedprotein2，Skp．2)是新近发现的一个癌基因，其主要功能是通过促进p27的降解调节细胞周期中G1～S期转变，从而在肿瘤发生发展中起作用[30,31】。研究发现，在大多数恶性肿瘤中Skp2表达有不同程度增高，同时伴有p27表达降低，两者呈负相关【32,33】。p27被认为是一个公认的抑癌基因，其表

3、达下降与多种肿瘤的发生和发展有关，并且有望成为一个独立的预后指标。而多数学者认为，Skp2是造成肿瘤组织中p27表达降低的直接原因。Skp2表达增高不同程度地影响肿瘤的分化程度及其恶性进程。与恶性肿瘤的分化程度、恶性进程及预后密切相关【34舶J。关于口腔疣状癌中Skp2和p27蛋白的表达及临床意义国内外罕见报道。本文选用与预后相关的p27和Skp2两个指标，通过免疫组化方法，检测口腔疣状癌中p27和Skp2蛋白的表达水平，探讨其在口腔疣状癌发生发展和转移中的作用，为口腔疣状癌的预后判断和基因治疗提供新的思路，探讨各临床分型的口腔疣状癌具有不同生物学行为的分子生物学基础

4、；同时选取口腔鳞癌和正常口腔粘膜组织作为对照，揭示其在口腔疣状癌和口腔鳞癌中的表达特点以及两蛋白异常表达与临床病理及患者预后的关系，研究两蛋白表达的相关性。为进一步深入了解口腔疣状癌与口腔鳞状细胞癌的区别和联系提供参考。2硕士学位论文材料和方法第二章材料和方法2．1实验对象取自1992年4月至2007年中南大学湘雅医院手术切除并经病理确诊为OVC的标本15例，其中外生型8例，浸润型6例，囊肿型l例；取自2006年至2007年中南大学湘雅医院手术切除并经病理确诊为OSCC标本30例，其中高分化癌15例，中、低分化癌15例。根据恶性程度不同，将OVC组分为外生型和非外生型

5、(浸润型和囊肿型)二组，将口腔鳞癌组分为高分化和中低分化二组。另取正常口腔粘膜标本15例作为对照。所有病例术前均未作放化疗，临床及病理资料齐全。临床分期采用国际抗癌协会的2002年的UICC(UnionInternationalContredeCancer，UICC)标准。15例OVC标本中男性11例，女性4例；年龄范围29．77岁，中位年龄51．4岁：肿瘤部位：颊部6例，牙龈5例，下唇2例，颌骨2例；I．II期12例，III．Ⅳ期3例。30例OSCC标本中男性26例，女性4例；年龄范围28—79岁，中位年龄50．8岁；肿瘤部位：舌部12例，颊部3例，牙龈5例，口底5

6、例，颌下4例，腭部l例。I—II期19例，Ⅲ．Iv期11例。淋巴结转移情况：口腔疣状癌中未见有淋巴结转移者，鳞癌中淋巴结转移者8例。2．2主要试剂兔抗人Skp2多克隆抗体，鼠抗人p27单克隆抗体，均为美国公司产品，购于北京中山生物试剂公司。S．P试剂盒(包括正常动物血清，生物素标记二抗工作液，辣根酶标记链酶卵白素工作液)、PBS缓冲液0．01M，PH7．4、浓缩DAB试剂盒均购于北京中山生物试剂公司。2．3主要仪器(1)OLYMPUS．BX50光学摄影显微镜(2)德国产MACRO．HM340E型病理石蜡切片机(3)国产HAY800型自动脱水机(4)国产DYX．DH$5

7、0X65S型电热恒温培养箱(5)GlanzWD900BS医学烧烤微波炉(6)容声RS．210型水箱硕士学位论文材料和方法(7)进口三道定时钟(8)微量吸管2．4实验步骤：采用免疫组织化学方法(S．P法)15例OVC组织，30例OSCC组织及15例正常口腔粘膜组织标本均经常规福尔马林固定，石蜡包埋，制备4u连续切片四张，80．1000C烤片24小时。分别用于HE染色(先行HE染色确认组织的病理学诊断)、Skp2和p27的免疫组化染色及空白对照。免疫组化染色对照：Skp2和p27用湘雅医院已确诊为乳腺癌标本的阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对