奈达铂、藤黄酸对a549ddp细胞的作用及其机制研究

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1、隶。轫大·磐临床医学硕士学位论文万方数据奈达铂、藤黄酸对A549／DDP细胞的作用及其机制研究专业名称}监庭医堂研究生姓名：王逖导师姓名：塞瞳堑万方数据Studiesontheaffectofnedaplatin，gambogicacideffectonA549／DDPcellsl·l-l■andtlleirmeclllanlSmADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYWangHuanS——upervi‘sed‘。by

2、Professor,ZhuXiaoliCollegeofClinicalMedicineSoutheastUniversityApril2014＼嬲0㈣772觚7蛳Y27万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：．》久日期：矽l￡}

3、．j．弓J东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：多疲导师签名：粗南o』日期：易Df职』、引万方数据中文摘要目的：本课题通过体外实验探讨奈达铂(N】)P)、藤黄酸(GA)对顺铂(DDP)耐药非小细胞肺癌细胞株(A549／DDP)作用及其

4、机制，旨在为筛选有效抗肿瘤药物和制定更加有效的顺铂耐药非小细胞肺癌治疗方案提供实验依据。方法：1．应用MTT方法研究DDP、NDP、GA单药以及DDP联合GA对A549／DDP细胞的生长抑制情况。2．应用等辐射分析方法进行DDP和GA联合作用与DDP、GA单药作用的差异分析比较。3．应用流式细胞术检测各单药或组合对A549／DDP细胞凋亡与细胞周期的影响。4．应用细胞免疫组织化学法定性及定位检测DDP、NDP、GA单药以及DDP联合GA处理A549／DDP后的P．gP、P53、Bcl．2及Bax的表达。5．应用蛋白质印迹法定量检测DDP、ND

5、P、GA单药以及DDP联合GA处理A549／DDP后的P．gP、P53、Bcl一2及Bax的表达结果：1．在A549／DDP和A549细胞中，DDP的IC5003．36士1．41pg／ml、2．53士0．121xg／m1)具有明显差异(P<0．001)，显示A549／DDP细胞的耐DDP的特性。2．在A549／DDP细胞中，NDP的IC50(19．97士0．88p咖1)与DDP的ic50(23．36士1．41斗g／m1)具有统计学差异(P=0．024)。NDP作用使A549／DDP细胞产生明显G2期阻滞(P=0．005)；也较DDP显著促进A

6、549／DDP细胞早期及晚期凋亡(P=0．010、P=0．005)。3．根据等辐射分析法，较低浓度DDP联合GA即可对A549／DDP细胞增殖产生50％抑制率(8．47土0．94：0．41xg／ml和4．58士0．95：0．8}tg／m1)。DDP联合GA作用较DDP、GA单药亦可明显诱导A549／DDP细胞产生G2期阻滞(P=O．02、P=0．012)：亦可明显提高A549／DDP细胞早期及晚期凋亡率(P=0．015，P=0．015；P=0．005，P=0．010)。4．NDP作用下的A549／DDP细胞P．ge、P53及Bcl．2表达较D

7、DP作用明显降低(P=O．014；P=0．020；P=O．008)，而Bax表达显著增加(P=0．024)，其中以Bcl．2表达降T万方数据东南大学硕士学位论文低最显著(P=0．020)；DDP联合GA作用下的A549／DDP细胞P．gP、P53及Bcl．2表达较DDP、GA单药作用明显降低(P=O．006，P=0．017；P<0．01，P=0．001；P=0．007，P=0．004)，Bax表达增加(P=0．006，P=0．007)，其中以P53表达降低最显著(P

8、均有表达，且表达无明显差异。结论：1、NDP对A549／DDP细胞有明显的抑制细胞生长、阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡的作用。2、较低浓度的DDP联合GA即可对A549