声带细胞外基质干预和人羊膜上皮细胞移植后声带瘢痕修复再生的研究

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1、万方数据复旦大学硕士研究生论文声带细胞外基质干预和人羊膜上皮细胞移植后声带瘢痕修复再生的研究Characterizationofscarredvocalfoldregenerationaftertheinterventionsofextracellularmatrixandhumanamnioticepithelialcellstransplanting复旦大学附属眼耳鼻喉科医院2014年4月清生瑞春甄魏生师究研导万方数据目录IIIIIIIIIIIlllMIIIIIIIIHIIIIIIIIIIIIIY28649

2、51中英文缩写对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31持言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5正文⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯7第一部分：人羊膜E皮细胞的分离、培养及生物学标记⋯⋯7第二部分：声带瘢痕模型的建立及实验处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12第三部分：人羊膜上皮细胞在瘢痕声带内的存活⋯⋯⋯⋯⋯16第四部分：声带形态学观察和组织学观测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21全文总

3、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33综致万方数据复旦大学硕士学位论文中英文缩写对照英文简写英文全名中文名称hAECECMHAPBSGFPHEDMEMEDTADAPIFISHMIFTGF—phumanamnioticepithelialcells人羊膜上皮细胞extracellularmatrix细胞外基质hyaluronicacid透明质酸phosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液greenfluorescentprotein

4、绿色荧光蛋白hematoxylin．eosinstaining苏木精一伊红染色Dulbecco’SmodificationofEagle’Smediumethylenediaminetetraaceticacid4’，6一Diamidino-2-phenylindole，dihydrochloridefluorescenceinsituhybridizationmacrophagemigration-inhibitoryfactortransforminggrowthfactorbata达尔伯克改良伊格尔培养基

5、胰酶一7,--胺四乙酸4’，6---脒基一2一苯基吲哚二盐酸盐荧光原位杂交巨噬细胞迁移抑制因子转化生长因子pIL．10interleukin10白细胞介素一10万方数据复旦大学硕士学位论文中文摘要目的应用声带细胞外基质干预(胶原酶和透明质酸注射)和人羊膜上皮细胞(humanamnioticepithelialcells，hAEC)在声带瘢痕内的移植，观测声带固有层及主要细胞外基质变化的特点，探索其对声带瘢痕修复再生的作用。方法对20只新西兰兔(40侧声带)中的38侧声带施行全身麻醉直接喉镜下声带锐性损伤，形成声

6、带瘢痕。分离培养实验用hAEC，慢病毒绿色荧光蛋白基因转染作标记。将hAEC移植入10侧瘢痕声带，即hAEC移植组；声带细胞外基质干预(注射胶原酶和透明质酸)10侧瘢痕声带，即基质干预组；hAEC移植同时细胞外基质干预10侧瘢痕声带，即复合组；瘢痕未处理8侧声带，即瘢痕组。2侧正常声带作为对照组。术后1个月、2个月时示踪观察hAEC在声带内的生长、分布及活性情况；术后1、2、3、6个月采用HE染色、Masson染色及免疫组化染色观察声带形态学变化及声带固有层胶原、纤维连接蛋白的分布及含量变化。结果hAEC原代培

7、养4d后呈铺路石样生长，移植入瘢痕声带后可在固有层内持续存活2个月；术后1、2个月免疫荧光显示角蛋白(上皮细胞标志性蛋白)荧光阳性；术后6个月光镜下观察并半定量分析示：瘢痕组较正常组胶原量明显增加、排列紊乱，hAEC移植组、基质干预组及复合组胶原量和排列较瘢痕组改善，hAEC移植组、基质干预组二者相似，复合组优于前两组，但均未及正常；免疫组化染色示瘢痕组较正常组纤维连接蛋白平均光密度明显增加，hAEC移植组、基质干预组及复合组纤维连接蛋白平均光密度介于瘢痕组和正常对照组之间，hAEC移植组与基质干预组相差不明显

8、，复合组优于前两组。结论声带细胞外基质干预和hAEC注射移植复合作用于兔瘢痕声带后，具有更好地促进声带细胞外基质分泌、合理分布及部分有序化排列的功能，促进声带瘢痕的修复再生。关键词：声带；瘢痕；羊膜；上皮细胞；细胞移植；再生；细胞外基质；兔中图分类号：R767．4万方数据复旦大学硕士学位论文AbstractObjectiveToinvestigatethetreatmentsforsc