基于温度敏感型材料的o-glcnac糖基化蛋白富集新方法研究

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1、万方数据分类号UDC密级学位论文基于温度敏感型材料的O．GlcNAc糖基化蛋白富集新方法研究作者姓名：指导教师：申请学位级别：学科专业名称：论文提交日期：学位授予日期：评阅人：马琳王建华教授秦伟捷副教授东北大学理学院军事医学科学院硕士学科类别：工程化学工程2014年6月2014年7月杨梅教授论文答辩日期：2014年6月答辩委员会主席：徐章润教授陈明丽副教授东北大学2014年6月万方数据AThesisinChemicalEngineeringInvestigationsontheEnrichmentofO-·Glycos

2、ylatiedProteinsUsingNovelThermosensitivePolymersIIerosensitive0lymersbyMaLinSupervisor：ProfessorWangJianhuaAssociateProfessorQinWeijieNortheasternUniversityJune2014万方数据独创性声明本人声明，所呈交的学位论文是在导师的指导下完成的。论文中取得的研究成果除加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的材料。

3、与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢=丘思。学位论文作者签名：马力林日期：夕D?≯．占、3秒学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解东北大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人同意东北大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索、交流。作者和导师同意网上交流的时间为作者获得学位后：半年口一年口一年半口两学位论文作者签名：弓a7阶签字日期：)oI译．占．弓。导师签名：签字日期：万

4、方数据东北大学硕士学位论文摘要基于温度敏感型材料的0．GIcNAc糖基化蛋白富集新方法研究摘要蛋白质的0．GIcNAc糖基化修饰过程，广泛存在于生物组织、细胞内，并且具有与蛋白质的磷酸化修饰相似的性质及功能，在各种生命活动中都有举足轻重的作用，如细胞识别、信号传导、免疫应答、基因转录等。要想从整体水平上明确相关疾病的发展，就要开展对于0一GIcNAc修饰的规模化研究。然而目前O．GlcNAc糖基化修饰的规模化鉴定面临以下主要困难：(1)O—GIcNAc修饰含量极低；(2)质谱检测时0．GIcNAc修饰肽段信号被大量的非

5、修饰肽段抑制；(3)O．GIcNAc修饰容易发生动态变化，在样品制备时很容易从蛋白质上脱落；(4)0一GlcNAc修饰肽段亲水性较强并且自身不带电荷，因而导致质谱信号响应差并且在二级碎裂时极易产生中性丢失，难以获得高质量的二级谱图。因此，为了提高0．GIcNAc修饰在蛋白质鉴定中的规模，急需发展一系列0．GIcNAc糖基化修饰的高效、快速富集及检测方式。这对于揭示蛋白糖基化在生理、病理过程中的重要作用都具有十分重要的意义。N-异丙基丙烯酰胺m．Isopropylacrylamide，NIPA)是目前为止性能最稳定、使用

6、最广泛的温度敏感型聚合物单体。当环境温度较低，没有到达最低共溶温度(LowerCriticalSolutionTemperature，LCST)时，聚合物在水溶液中以线性分子的分散状态存在，溶液呈澄清透明状态；当环境温度到达或高于相转变温度时，聚合物自发卷曲，疏水基团暴露在外侧，从而逐渐从水溶液以沉淀形式析出，达到非均相的状态。以该聚合物作为富集基质，通过改变不同温度条件，可以实现均相分散与异相沉淀的快速转化，应用于低丰度蛋白／肽段的富集。采用该可溶性聚合物载体在均相体系中进行富集反应，可有效避免使用常规固相载体材料富

7、集时较高的固．液界面传质阻力，以及载体材料．目标分子间较大的空间位阻。在显著提高富集速率、效率的同时又可利用温敏聚合物在高温下沉淀析出的特性，快速、高效地完成复杂样品中目标产物的分离与回收。论文第一章综述了蛋白质组学发展现状、糖基化蛋白质的研究以及基于生物质谱技术对于O．GIcNAc糖蛋白的规模化鉴定；O．GIcNAc糖蛋白常用的富集方法主要有凝集素富集法、抗体富集法、代谢标签富集法、化学酶促标记富集法、p一消除．迈克尔加成富集法、酰肼富集法等；温度敏感型聚合物简单介绍、常用条件以及施陶丁格反应的原理及应用。万方数据东

8、北大学硕士学位论文摘要论文第二章制备了施陶丁格试剂修饰的琼脂糖凝胶，并基于施陶丁格基团与叠氮的特异性反应，将其应用于叠氮标记的标准0．GIcNAc修饰蛋白的富集研究。实验首先优化了材料制备时施陶丁格基团的固载量及富集材料的使用量，并进一步通过对牛血清白蛋白与叠氮标记的标准0．GIcNAc修饰蛋白混合物的富集，考察了该材料富集的选择