乳腺癌干细胞富集及其特异性多肽的筛选

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1、摘要目的：无血清培养法富集乳腺癌干细胞(BCSC，breastcancerstemcell)并利用噬菌体展示技术，筛选能特异性结合乳腺癌干细胞的噬菌体多肽，为从干细胞角度靶向治疗乳腺癌奠定基础。方法：首先无血清培养法富集乳腺癌MDA—MB-231细胞株中干细胞并以此为靶标，以hs578bst人正常乳腺细胞及普通培养的MDA—MB一231细胞为减性筛选细胞，对噬菌体随机十二肽库进行双重减性筛选，选取富集后的阳性单克隆噬菌体，ELISA及DAB染色鉴定阳性噬菌体特异性并测序。结果：经过3轮筛选，噬菌体得到约500倍的富集，随机挑选1

2、0株噬菌体单克隆，ELISA及DAB染色验证显示6号噬菌体单克隆对乳腺癌干细胞具有特异亲和性。结论：通过干细胞富集及噬菌体展示技术，成功筛选出能够特异性结合乳腺癌干细胞的特异性噬菌体多肽，为乳腺癌的干细胞靶向治疗和深入研究奠定基础。硕士研究生孔冕(肿瘤学)指导教师李宝江教授关键词：乳腺癌干细胞；噬菌体展示；乳腺癌；噬菌体随机十二肽库；筛选AbstractObjective：Isolatebreastcancerstemcellsusingserum—freeculturetechnique，andapplyphagedispla

3、ytechnologytoscreenpeptidesbondingtoitusiIlgstemcellsastarget，laythefoundationforthestemcelltargetedtherapyofbreastcancer．Method：Aphagedisplayrandom12peptidelibrarywasscreenedusingbreastcancerstemcellsastargetisolatedfromMDA-MB一231celllinebyusingserum-freeculturetech

4、nique．hs578bstcellsandMDA．MB-231assubtractbiopanningcells．ThespecificityofthepositivecloneswasidentifiedbyELISAandDABstaining，positivephagesweresenttosequencingcompanyforDNAsequencing．Result：Phagesweregathered500timesafter3roundofbiopanning，10cloneswerechosenforELISA

5、andDABstaining，resultsshowedNO．6phageclonehadahighspecificitybondingtobreastcancerstemcells。Conclusion：Weisolatedaphagedisplaypeptidebondingtobreastcancerstemcellsbyphagedisplaytechnology,andlaidthefoundationofthefurtherstudyofthestemcelltargetedtherapyofbreastcancer

6、．Postgraduatestudent：KongMian(Ontology)DirectedbyProf．LiBaojiangKeywords：breastcancerstemcell；phagedisplaytechnology；breastcancer；phagedisplayrandom12peptidelibrary；screening目录引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1第一章乳腺癌干细胞的富集及受体菌的复苏和培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．3讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第二章乳腺癌干细胞特异性噬菌体的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72．2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．82．3讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第三章富集噬菌体的特异性鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一113．2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯123．