中草药中乙醇脱氢酶抑制剂的靶向筛选与分离

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1、万方数据万方数据原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：巡年—上月』选日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文

2、的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：阻导师签名：期：2垒陛年j二月上L万方数据中草药中乙醇脱氢酶抑制剂的靶向筛选与分离摘要：乙醇脱氢酶(ADH)是参与乙醇在体内代谢的主要酶。ADH抑制剂可以通过抑制ADH的活性，达到缓解酒精中毒的目的，也是目前临床上使用的毒性醇中毒解毒药物。目前现有的ADH抑制剂价格昂贵且副作用多。近年来的研究发现，天然的活性物质作为药物时副作用更小，安全性更高，更符合

3、患者对绿色天然的健康需求。然而天然产物种类繁多、成分复杂、有效成分含量低，传统的天然产物活性成分筛选方法费时、费力而且效率低下。天然产物复杂体系中活性物质的快速筛选与分离也一直是中草药研究的热点和难点问题。近年来，在快速筛选活性物质的新方法中，基于生物亲和作用的靶向筛选引起了研究者的关注。本论文针对中草药中ADH抑制剂的靶向筛选和分离开展研究。主要研究工作如下：1．制备TFe304@Si02磁性纳米粒子，并以该纳米粒子为载体、戊二醛为交联剂对ADH进行固定化。测定了固定化酶中ADH的负载量。探讨了温度和pH对固定化ADH和游离A

4、DH活性的影响。结果显示ADH被固定化后，酶的热稳定性和pH稳定性均比游离ADH有所增强，并且固定化ADH有很好的重复利用性和稳定性。采用Fe304@Si02．ADH磁性纳米粒子靶向筛选甘草中的ADH抑制剂，考察并优化了筛选条件，结果筛选得到9个ADH抑制剂，其中7个物质是首次被筛选出的具有ADH抑制活性的物质。2．构建了超过滤结合高速逆流色谱靶向筛选和分离甘草中ADH抑制剂的新方法。考察并优化了酶浓度、孵育时间、pH和温度等超过滤条件对筛选的影响。在最优条件下对甘草提取液进行ADH抑制剂的筛选，最终发现3个活性化合物具有抑制作

5、用。结合高速逆流色谱对这些活性化合物进行分离，溶剂体系为乙酸乙酯一甲醇一水(5：4：1)。通过对分离得到的化合物进行结构鉴定，这3个化合物分别为甘草苷、异甘草苷和甘草素。其中异甘草苷的ADH抑制活性最强，其IC50为8．95山VI。3．研究建立了超过滤结合高效液相色谱靶向筛选广金钱草中ADH抑制剂的方法。考察优化了酶浓度、孵育时间、pHSU温度对筛选的影响。在最优条件下采用超过滤对广金钱草提取液进行筛选，最终筛选得出2个ADH抑制剂，通过与实验室标准化合物比照，这2个化合物分别为香树素和芒柄花黄素。其中香树素是首次被发现万方数据

6、的具有ADH抑制活性的物质。关键词：乙醇脱氢酶抑制剂；固定化酶；磁性纳米粒子；超过滤；高效液相色谱；高速逆流色谱分类号：0651万方数据ScreeningandisolationofalcoholdehydrogenaseinhibitorsfromChineseherbalmedicinebyactivity．guidedfractionationAbstract：Theliverenzymealcoholdehydrogenase(ADH)isresponsiblefortheoxidativemetabolismofeth

7、an01．Itsinhibitorscouldsuppresstheacetaldehydeaccumulationinalcohol-hypersensitivealcoholicsbyinhibitingtheactivityofADH．ADHinhibitorsalsoplayanimportantroleinthetreatmentofhumanmethan01andethyleneglycolpoisoning．ADHinhibitorshavebeendevelopedthathavemuchsideeffectsa

8、ndtooexpensive．Recently,activecompoundswerefoundinnaturalplants，whichshowedfewersideeffects，highersecurityandmoresuitablefortherequ