tβ4转基因绒山羊中目的基因拷贝数及表达量与产绒性能关系的研究

《tβ4转基因绒山羊中目的基因拷贝数及表达量与产绒性能关系的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号——学校代码10126论文题目编号——学号三!lQ墨Q2垒T134转基因绒山羊中目的基因拷贝数及表达量与产绒性能关系的研究THESTUDYOFTARGETGENECOPYNUMBER／EXPRESSIONLEVELANDPRODUCTIONPEI江ORMANCE烈T134TRANSGENTCCASHMEREGoATS研究生：郭楂丕指导教师：塞4丕至婴宜旦专业：动物堂研究方向：生殖生物堂拯生物撞丕所在学院：生盒型堂堂陵二。一四年四月IlllIlllillIIIIIIIIUI原创性声明Y2571616本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指

2、导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已经注明引用的内容外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得凼墓直太堂及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名日指导教师签名：、巧∥、l如，妒．J-·，在学期间研究成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制

3、手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师的同意；若用于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。学位论文作者签名：指导教师签名：日⋯．期：≯嗥善矽日期：内蒙古大学硕士毕业论文T肛转基因绒山羊中目的基因拷贝数及表达量与产绒性能关系的研究摘要21世纪以来，随着基因工程、显微注射、体细胞克隆、胚胎移植等相关技术的不断完善，转基因动物的生产得到了迅速的发展。2008年，我国启动了转基因动物新品种培育的重大专项

4、，转基因动物的生产与培育取得了显著性的进展。目前，我国已经获得了多种转基因哺乳动物，本实验室于2011年也获得了我国首例胸腺素D4基因转基因克隆绒山羊。研究表明：胸腺素p4的过表达可以促进毛囊的生长和发育，而外源基因的拷贝数和整合位点与外源基因的表达有着密切的联系。因此，本实验选取产绒性能显著改善的转TIM基因绒山羊(NO．91和NO．28)和产绒性能未显著改善的转TIM基因绒山羊(NO．14和NO．94)，分析外源基因的拷贝数与表达量之间的关系；再通过与体细胞克隆绒山羊(NO．81)的比较，研究T[34基因表达量与产绒量之间的内在联系，为转基

5、因绒山羊的检测和转基因新品种的培育提供可靠的技术方法和理论依据。1)转基因绒山羊的阳性检测本实验首先采用Southernblot和PCR技术同时筛选转基因阳性绒山羊，然后再利用单一PCR技术对外源基因的多个位点进行鉴定。结果表明：四只转基因绒山羊全部为阳性，并且外源基因的多个位点(KAP6．1、Tp4、CMV启动子、DsRed和新霉素抗性基因)都整合到转基因绒山羊的基因组中。2)外源基因拷贝数检测本实验以glucagon作为内标准基因，利用实时荧光定量PCR技术检测外源基因的拷贝数。绝对定量PCR的标准曲线为：l095N=．0．3794ACt+

6、0．8384(R2TB4转基因绒山羊中目的基因拷贝数及表达量与产绒性能关系的研究=0．9969)(ACt为外源基因Ct与内标准基因Ct的差，N代表拷贝数)，计算得到NO．28、NO．91、NO．14和NO．94原代转基因绒山羊中外源基因的拷贝数分别为2、4、6和1。3)T134基因的相对表达量选取GAPDH作为内参，利用实时定量荧光PCR技术检测T134基因mRNA的相对表达量，结果表明：内源基因GAPDH和目的基因T134标准曲线的相关系数分别为0．999和0．997，扩增效率为O．97和0．96；与体细胞克隆绒山羊NO．81相比，NO．28

7、、NO．91、NO．14和NO．94的mRNA的相对表达量分别为2．68、2．46、2．36和2．57倍；选取13-actin作为内参，利用westernblot技术检测Tp4基因蛋白质的相对表达量。westernblot结果显示：与体细胞克隆绒山羊NO．81相比，NO．28、NO．91、NO．14和NO．94的蛋白质相对表达量分别为1．384、1．380、1．166、0．982倍。4)T肛基因在毛囊中的表达量及绒毛比和产绒量分析采用石蜡切片和免疫组化技术分析毛囊中Tp4基因的表达量，结果显示NO．28、NO．91、NO．14和NO．94的毛囊

8、中蛋白质的相对表达量是分别为体细胞克隆绒山羊NO．81的1．908、1．442、1．233、1．331倍。应用冰冻切片和HE染色来分析转基因绒山羊皮肤