产酶溶杆菌oh11胞外多糖合成相关基因的克隆及其与生物膜形成的关系

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1、文献综述第一章植物病害生物防治研究进展复配植物制剂较单一制剂效果明显增强，是今后研究和开发的重点。现在一般多采用复配中草药。如浙江省博杰科技有限公司，从白芷、泽兰、苦参等20多味中草药中提取活性物质，研制开发了专利产品“植保101”、“植保102”、“植保103”，对植物因真菌引起的腐烂、根腐、锈病、黑星病有很好的防治效果【3t29’301。1．4遗传工程菌遗传工程菌的构建，是获得高效拮抗细菌的重要途径。陈志谊等【3l】在对原始菌株B．916的选育过程中，经过自然选育、紫外诱变使拮抗细菌生长速度提高了32．9％，拮抗能力提高了210％，大大提高了拮抗细菌的拮抗效果。彭于发等

2、【32】将转座子导入小麦根部定殖的风例如聊D行傩spp．基因组内，选出抗小麦全蚀病的工程拮抗细菌，+拮抗效果提高了23倍，并有显著刺激小麦生长的作用。通过对水稻白叶枯病菌的办伊基因进行缺失，构建成遗传工程细菌Du728，应用于植物病害的生物防治，表现出一定的防病增产效果【33】。用D咀728菌液喷雾，温室试验表明，Du728对水稻白叶桔病的防治效果达到50％，在Du728中加入10斗卧n1的水杨酸可以提高防治效果，防治效果可以达到60％。这可能是该菌株能够有效地侵入水稻组织和细胞中，且能定殖和占据侵入位点，与病原菌竞争的结果【341。同时，Du728也可以诱导水稻幼苗对自叶

3、枯病菌产生抗性【351。另外，对放射土壤杆菌菌株K-84的遗传改造，构建成更加安全有效的工程菌株K1026。Sunclheim【36】从沙雷氏菌中克隆出几丁质酶助根I片断构建质粒转到卫．肚D册化珊中，转化子能抑制凡踟，．m，，lspp．的芽管生长，减轻萝卜枯萎病、稻瘟病和多种土传病害的为害。1．5转基因植物当前国内外研究开发的转基因植物达120多种，已有40种转基因植物进入田间试验或在环境释放。我国转基因植物的研究也获得了巨大发展。据统计，研究和开发的转基因植物达47种，涉及各类基因103种，其中与病虫草害防治相关的基因约62种。现已自行研究培育出了抗病毒病的烟草、番茄和甜

4、椒以及抗白叶枯病的水稻等【3’371。尽管目前对转基因食品的安全性有不同看法，但是基因工程还是受到各国的高度重视，在农业资源开发方面所起的巨大作用同样也是不可忽视的。1．6其它除上述5类生物农药外，与此相近的生化农药也受到广泛重视。1999年诺华公司第1个商品化的植物活化剂“Bion”(水杨酸类似物)，2001年美国Ed吼生物技术公司开发的“Messenger(Ha印洫)"，被EPA批准在全美农作物上使用。寡聚糖生物农药作为一类新型的植物激素及植物抗性反应激活因子，在农作物生长发育和病虫害4文献综述第一章植物病害生物防治研究进展防治中有着广阔的应用开发前景。已有研究结果表明

5、：寡糖生化农药能有效的控制棉花黄萎病及大豆花叶病，防效分别为80％和7l％。由于寡聚糖类农药的原料来源丰富，天然无毒，对人畜无害，不污染环境，水溶性好，使用剂量低而且价格与有机农药相近，有人预测对其研究开发将带来一场农药发展的突破性进展【3】．此外，国内外对利用有机改良剂防治植物土传病害的研究逐渐重视，发现’匕个仪能增强土壤肥力，提高农产品产量和品质，而且能改善土壤微生物环境。有机改良剂种类繁多，主要有壳质粗粉、植物残体及加工废料、绿肥、饼肥、堆肥和粪肥等。国内外学者多次研究报道虾蟹壳等壳质粗粉对植物土传病害如镰刀菌枯萎病、根腐病、黄萎病有较好的防效。2．生防机制一般认为生

6、防作用机理包括直接作用和间接作用两个方面。2．1直接作用2．1．1拮抗作用拮抗微生物在代谢活动中通过分泌抗菌物质直接对病原物产生抑制是自然界普遍存在的现象。拮抗作用是指生防菌能够产生对病原菌具有拮抗作用的物质，如几丁质酶、抗生素、细菌毒素等，能限制、控制或影响病原菌的生存或活动，甚至杀死病原菌的现象，通常在培养皿中看到的抑菌圈就是抗菌物质作用的表现。几丁质酶广泛存在于各种植物、动物及微生物细胞和组织中，参与多种生理代谢过程。大多数植物病害是有真菌引起的，几丁质是构成大多数真菌细胞壁的主要成分。因此，几丁质酶在控制植物病害方面起着重要的作用。自Toyoda发现灰色链霉菌产生的

7、几丁质酶纯化后对小麦白粉菌的吸器具有完全溶解作用以后，产几丁质酶的微生物及其离体几丁质酶对真菌生长抑制作用的研究，逐渐引起人们的重视。其他还有，利用放线菌分离物够．1，3一葡聚糖酶、B．1，4．葡聚糖酶和B．1，6．葡聚糖酶可控制草莓疫霉引发的悬沟子根腐病等【4们。细菌于离体培养产生的抗真菌代谢物在活的有机体里仍有活性。这些代谢物包括氨、丁酸内酯、2，4．双乙酰间苯三酚、氢氰化物、寡霉素A、吩嗪．1．羧酸(PCA)、藤黄绿脓素(Plt)、吡咯菌素(Pln)、酰胺粘液菌素、黄色细菌素、雌雄霉素A和一些未确定物质。通过