嗜群血蜱共生菌的研究

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1、中图分类号：Q958UDc：590诃誊￡解■刚粤(I辟密级：学校代码：硕士学位论文(学历硕士)公开10094嗜群血蜱共生菌的研究ResearchesonthesymbiontsofHaemaphysalisconcinna研究生姓名：指导教师：学科专业：研究方向：论文开题日期：刘钊刘敬泽教授生态学生理生态与分子生态学2012年4月lO日h事尤乒已’

2、●-学位论文原创性声明本人所提交的学位论文《嗜群血蜱共生菌的研究》，是在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的原创性成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果

3、。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中标明。本声明的法律后果由本人承担。论文作者(签名)：引反_砂f牛年多月q日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在呈年解密后适用本授权书)论文作者(签名)：纠危川硇牛年}月明日1o、，1]釉钻厂雠珂／0月认f确F孵年勃岬导矿削Z身1衣戈硇．．L＼，名月签，0隧师刍拗叫

4、导沪指摘要嗜群血蜱(Haemaphysalisconcinna)是专性吸血的外寄生节肢动物，隶属于硬蜱科血蜱属，是多种病原菌的重要传播媒介。该蜱主要分布在前苏联、日本、欧洲等国家和地区，在我国的多省区如吉林、内蒙古、新疆、甘肃、黑龙江和四川等地均有发现。自上世纪90年代末以来，四川地区陆续暴发了多次嗜群血蜱虫害，对农业和人畜造成了极大的危害。该蜱一年至少可繁殖2代，与长角血蜱相似。蜱的共生菌与蜱的发育和繁殖等生物学过程密切相关，但尚未对这一类群的共生菌进行研究。首先，本文通过构建细菌16SrRNA基因文库和PCR-RFLP技术分析嗜群血蜱体内的微生物多

5、样性。发现Coxiella．1ike(CLS．Hc)共生菌，其与进化关系最近的物种16SrRNA基因序列相似度为97％。在嗜群血蜱中未检测到Rickettsia．1ike、Arsenophonus．1ike、Francisella-like和Wolbachia等其他已报道的蜱类共生菌。运用透射电子显微镜技术对CLS-He的结构形态进行了初步观察，结果与已报道的Coxiella-like共生菌的形态结构一致。其次，设计嗜群血蜱共生菌CLS．He的特异性引物，通过诊断PCR检测CLS．Hc的感染率、垂直传递性和感染位点。感染率检测结果：CLS．Hc在实验室

6、种群的雌蜱和雄蜱中的感染率均为100％；垂直传递性检测结果：CLS．Hc在卵、幼蜱、若蜱、成蜱(雌蜱、雄蜱)及F1代卵中均有存在，说明CLS-Hc在嗜群血蜱中可垂直传递。感染位点检测结果表明CLS．Hc特异性感染嗜群血蜱的卵巢和马氏管，说明CLS．He在嗜群血蜱中的感染具有组织特异性。最后，运用实时荧光定量PCR技术分析了共生菌CLS．Hc的数量动态，探究共生菌与嗜群血蜱发育的关系。结果显示：CLS．Hc在卵中密度最大，若蜱中密度最小，在成蜱中密度又有小幅增加；CLS-Hc在若蜱饱血前后变化明显，饱血期密度显著高于饥饿期：在卵巢中，CLS-Hc密度在饱

7、血后1天密度最低，2天时密度达到最高，此后保持在较低水平；在马氏管中，密度整体呈现由高到低的趋势，饱血后l天密度最高，到第7天密度降至最低。因此，初步推测CLS．Hc可能与嗜群血蜱的某些生命过程密切相关。关键词：嗜群血蜱共生菌CLS．Hc实时荧光定量PCR数量动态AbstractHaemaphysalisconcinnabelongstoarthropodwhichisablood-feedinganimal．Theyarepronetoacquiringvariouspathogensandspreadingamongvertebratespecie

8、sduringthewholelifecycle，andmainlydistributesinJilin，InnerMongolia，Xinjiang，Gansu，Heilongjiang，SichuanandotherplacesinChina．Inabroad，itmainlydistributesintheformerSovietUnion，JapanandEurope．Sincethe90’Softhelastcentury,SichuanareaoutbreakanumberofHaemaphysalispest，whichhasagreat

9、influenceonagricultureandlivestock．Thetickscanp