分析方法的论证：方法学

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1、分析方法的论证：方法学介绍Q2A阐述了分析方法论证中应考虑的项目，，本文件是对Q2A的补充，其目的是对每一种分析方法的各种论证项目提供指导和建议。在某些情况下(如专属性论证)为了确保原料药和制剂的质量，应对一些综合起来的分析方法的总体能力进行研究。此外，文件对在申报中必须要递交的资料作了指导。所有论证中的相关数据和论证项目的计算公式都应申报并进行讨论。指导原则中末提到的方法，也可应用和采纳。申报者的责任应是选择最适合他们产品的论证方法和草案。但要切记，分析方法论证的主要目的是证明其适合于预期目的。对于生物技术

2、产品和生物制品，由于它们的复杂特性，在某些情况下，其分析方法也许与本文件中提到的方法不同。在整个方法学论证研究过程中，必须使用已鉴定并标示纯度的参比物，其纯度要求取决于预期用途。与Q2A一样，为清楚起见，本文件在各独立的章节中考虑了不同的论证内容，这些章节的排列反映了建立和评估一种分析方法的过程。事实上在进行实验设计时，通常可以同时考虑合适的论证项目，以了解分析方法分析能力的合理性和总体情况，如：同时考虑专属性、线性、范围、准确性和精密度。1．专属性在鉴别、杂质和含量测定的方法学论证中应进行专属性研究，证明专

3、属性的方法将取决于分析方法的预期目的。一般一种分析方法不太可能对某一特定的被分析物具有专属性(完全鉴定)，在此情况下，建议采用两种或两种以上的分析方法以达到能鉴定的水平。1．1鉴别合适的鉴别试验应能区别出可能存在结构相似的化合物。可以通过与已知参比物比较，从含有被分析物的样品中得到的正结果和不含被分析物的样品中得到的负结果来确定。此外，鉴别试验也可以取与被测物结构相似或相关的物质来试验而得不到正反应来证实。在考虑可能会造成干扰的前提下，应根据合理科学的判断来选择可能存在的干扰物。1．2含量测定和杂质检查产色谱

4、方法中，应用典型的色谱图来证明专属性，并在图上恰当地标出每一种成分，其他分离技术也应如此。在色谱方法中，应在一等程度上考察关键性的分离。对关键性分离，可用两个洗脱程度最接近的化合物的分离度来证明其专属性。当非专属性方法测定含量时，可用其他辅助性的分析方法来证实整个方法的专属性，如：用滴定法来测定出厂原料药的含量，可结合使用和是的杂质检查方法。下述方法均适用于含量测定和杂质检查1．2．1可以得到杂质的情况对含量测定来说，专属性应包括提供被分析物在杂质和(或)赋形剂存在时能被区分的证明，实际操作中可以在纯物质(原

5、料或制剂)中加入一定量的杂质或辅料，与未加杂质或辅料的样品测定结果相比较，以证明其含量测定结果不受这些物质的影响。对杂质检查采说，通过加入含有一定量杂质的原料药或制剂，证明各杂质之间能分离，并也能与样品基质中其他组分分离。1．2．2无法得到杂质的情况如果杂质或降解物的对照品不能得到，专属性可以通过路含一定量的杂质或降解产物的样品测定结果与另一种成熟的方法测定结果比较，如药典方法或经论证的其他方法(独立的方法)进行比较来证实。必要时，应包括放置在强力破坏试验条件下，即光、热、湿度、酸碱破坏及氧化情况下的样品的测

6、定。一对于含量测定，需要比较两种方法的结果。一对于杂质检查，要比较杂质的概况。峰的纯度试验是很有用的，它显示被测物色谱峰是单个还是多个成分(如二极管阵列、质谱)。2．线性线性是在分析方法的范围内(见第3节)对方法进行评价。可用所建议的分析方法，直接对原料药(用标准储备溶液稀释)和(或)对分别称取制剂组分的混合物进行测定，以证明其线性。线性关系应以信号对被分析物的浓度或含量做图，根据图形是否线性进行评价。如果有线性关系，可用适当的统计方法估算试验结果，如最小二乘法。在某些情况下为使分析指标和样品浓度呈线性关系，

7、在回归分析前应对测试数据进行数学转换。由线性回归估算所测得的数据本身又有助于数学评价线性的程度。上报资料中应含相关系数、y轴上的截距、回归线的斜率、剩余方差，还应包括数据图表。另外，分析真值与回归线的偏差也有助于对线性作评价。一些分析方法，如免疫测定法，在任何转换后，均不能证明呈线性，在这种情况下，分析的响应值应用样品中被分析物的浓度(含量)的适当函数来表示。为建立线性，建议至少用5个浓度。若用其他方法则应证明其合理性。3．范围特定的范围一般是从线性研究中得到的，它依赖于分析方法应用目的。确定范围的方法是：样

8、品中含有被分析物的量在范围内或在范围末端，该分析方法均能获得良好的线性、精密度和准确性。至少应考虑如下最小的规定范围：一对原料药或成品的含量测定：测试浓度范围一般应在80％一120％内。一对含量均匀度检查：应在测试浓度70％一130％内，超出此范围，应有正当理由，主要是根据剂型的特点(如计量型的吸入剂)。一对于溶出度试验，应为规定范围的±20％，例如：如果是控释制剂，规定1小时后达到20％，24小时