mtdh基因沉默对乳腺癌mcf-7adr细胞增殖和化疗敏感性的影响

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2、指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：只要导师签章：y厅日目录?IllllllttllUUl《ltllltlltll／rlllllllllfll／llY2582752中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯5研究论文MTDH基因沉默对乳腺癌MCF．7／ADR细胞增殖和化疗敏感性的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、20附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一27讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一29结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯_·34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一33综述MTDH基肿瘤耐药的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·39致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一48个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··49中文摘要MTDH基因沉默对乳腺癌MCF-7／ADR

4、细胞增殖和化疗敏感性的影响摘要目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，约占女性恶性肿瘤的23％，占女性癌症死亡人数的14％n1。乳腺癌的发生、进展、转移及耐药是一个多基因、多要素共同作用的结果。现有研究表明：乳腺癌具有高度异质性，乳腺癌因分子表型不同对特定治疗的反应不同，乳腺癌的转归、预后也不同。伴随着分子生物学的高速崛起和各种高新生物技术的涌现，探讨乳腺癌发生及发展的分子机制，寻找相关的生物学标志物已成为医学研究热点。。MTDH基因即转移粘附基因(memdherm，MⅡ)H)，又称星形胶质细胞上调基因．1(AEG．1)，此基因过表达可能与乳腺癌的发生、进展及耐药有

5、关。MTDH的过表达使乳腺癌细胞产生耐药性的具体机制尚不完全清楚，目前的研究提示可能存在以下机制：(1)MTDH使细胞从G1期进入S期，从而降低G期细胞的相对数量比，控制肿瘤细胞凋亡。(2)高表达的MTDH使多元抗药性基因(multidrugresiStancegenelMDRl)高表达，而正是由于此种蛋白高表达增加癌细胞药物抗性，降低化疗药物浓度。因此对乳腺癌MTDH在细胞生物学行为中作用的探索以及将MTDH基因作为乳腺癌治疗的一个潜在靶点意义重大。本实验通过RNAi干扰技术抑制乳腺癌MCF一7／ADR细胞MTDH的表达，观察其对乳腺癌MCF．7／ADR细胞增

6、殖、转移及耐药性的影响，探讨MTDH基因在乳腺癌MCF．7／ADR细胞生物学活动中的作用，为MTDH．siRNA的个性化、靶向性治疗乳腺恶性肿瘤提供实验基础及理论依据。方法：本实验成功构建MTDH-siRNA．1、MTDH．siRNA一2、MTDH-siRNA．3、empW-siRNA四组干扰siRNA。用RNAi干扰技术使MTDH基因沉默。用RefltimePCR法和WeStemB10t法测定沉默前后乳腺癌MCF．7／ADR细胞株中MTDH基因的mRNA及蛋白表达水平。用MTT法绘制沉默前后乳腺癌MCF一7／ADR细胞株的生长曲线。也通过MTT中文摘要法检测沉

7、默前后MCF．7／ADR细胞株对lmg／L阿霉素及8mg／L紫杉醇在24h时的药物敏感性。用SPSSl3．0统计分析测定沉默前后MCF．7／ADR细胞株MTDH的mRNA、蛋白表达水平及药物敏感性是否存在差异。结果：1RealtimePCR及WesternBlot筛选沉默效果最佳的MTDH．siRNARealtimePCR结果表明：与未转染组相比，转染MTDH．siRNA．1、MTDH．si黜呵A．2、MTDH．siRNA．3的人乳腺癌MCF．7，ADR细胞内MTDHmRNA水平分别下降了46．88％、77．88％、30．12％，其中M仍H-siRNA．2对M耵

8、)№RNA的表达干扰作用