3种重要经济头足类微卫星标记的分离及特性研究

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1、中国海洋大学硕士学位论文3种重要经济头足类微卫星标记的分离及特性研究姓名：左仔荣申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：郑小东20120601中国海洋大学硕士学位论文3种重要经济头足类微卫星标记的分离及特性研究摘要长蛸(GIcfI印淞所砌D厂)、真蛸(GIcf印搬1，”7』睥厂括)、莱氏拟乌贼(S印泐P甜，办括彪骶D门胁n口)是经济头足类，其肉嫩味美、营养丰富，是深受世界各地人们喜爱的美食。近年来，生存环境的破坏、过度捕捞等使其自然资源遭到破坏。因此，开展种群遗传结构调查对其资源保护具有极其重要的意义。微卫星标记以其共显性，高多态性等特点成为研究遗传

2、结构和生物进化的有力工具。本研究应用磁珠选择法从基因组中分离了3种头足类的微卫星位点，共获得微卫星序列230条，分析其多态性，并向GeIlBank提交微卫星序列53条。目前，头足类中微卫星位点的开发工作还处在起步阶段，长蛸、莱氏拟乌贼的微卫星位点未见报道，而真蛸也只有Greatorex等(2000)开发的6个位点，这远不能满足头足类种质资源调查和遗传多样性研究的需要。本实验采集山东荣成(37．16。N，122．410E)的长蛸，福建霞浦(26．890N，120．oo。E)的真蛸，海南陵水(18．480N，110．020E)的莱氏拟乌贼野生个体，应用磁珠

3、杂交富集法进行了微卫星位点的分离。从长蛸富集文库中PCR筛选625个菌落，挑取115个克隆测序，最后设计了50对引物，经聚丙烯酰胺凝胶检测获得12个多态性微卫星位点；筛选真蛸250个菌落，挑取70个克隆测序，设计55对引物，最后筛选出17个多态性位点；挑取360个莱氏拟乌贼菌落进行PCR筛选，送97个克隆测序，共设计引物52对，24个位点具有多态性。采集野生群体检测其多态性，等位基因数目、观测杂合度、期望杂合度等参数被用来评估每个位点的多态性水平。长蛸12个位点中，等位基因数为2—11，平均值为5．4；观测杂合度为0．200．1．000，平均0．635

4、；期望杂合度为O．235．0．869，平均O．630。真蛸17个位点中，等位基因数位3．17，平均值为8．5；观测杂合度0．154．1．000，平均0．809：期望杂合度为0．214一O．925，平均0．750。莱氏拟乌贼24个位点，等位基因数为4．26，平均13．25；观测杂合度为0．188．0．828，平均0．675；期望杂合度为O．392一O．92l，平均0．852。这些位点将成为调查3种头足类种群遗传结构的有力工具。关键词：头足类；长蛸；真蛸；莱氏拟乌贼；微卫星；遗传多样性中国海洋大学硕士学位论文IsolatioⅡandcharacter娩at

5、ionofmicrosatemtelociinthreecephalopodsAbstract0cf印螂朋加D厂，0cf印埘V“如弘，-括and却fD陀甜砌扭尼船伽胁刀口，havebecomecommercialcephalopodsinmeworld．Inrecentyears，thesha印declineofnaturalresourceswasduetoenViro】姗entaldes昀ctiona11doVemshing．ItisnecessaryforspeciesconservationtodetectgeneticV撕ationa11dp

6、叩ulationstmcmre．MicrosatelliteDNAmarker，诚tlltlleadValltageofcodominaIlt，multiaJlelica11dlliglllyp01ymo印11icnature，isaIlavailabletoolingeneticsa11deVolutionresearches．111eIllicrosatellitelociiIlt11et11reec印halopodswereis01atedbaSedonm曩匦eticspheresaIldmicrosatellitee11richedgenoIl

7、lic1ibraⅨaIldtllepolymo印11ismofmeseprimersineachpopulation、Verealsoanalyzedby6％denaturingpo】yacrylamidegelusingsilVerstai面ng．T6tal53microsatellitesequencewere鲫【bmittedtoGehBank。M锄ybiologistSfocustlleiranentionontllestlldyofpopulationgeneticstmctureaIldpopulationdiVers时i11cephalo

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