携重组人血管内皮抑制素脂质微泡的制备、表征及抗血管生成初步研究

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1、福建医科大学硕士毕业论文分类号：R445.1学校代码：10392学科专业代码：105107学号：200901258福建医科大学硕士研究生毕业论文携重组人血管内皮抑制素脂质微泡的制备、表征及抗血管生成初步研究Preparation,characterizationandantiangiogeniceffectsofrecombinanthumanendostatinloadedlipidmicrobubbles学位类型：临床医学硕士所在学院：协和临床医学院研究生：张秀娟学科、专业：影像医学与核医学导师：薛

2、恩生教授研究起止日期：2011年1月至2012年3月答辩日期：2012年5月29日二○一二年六月万方数据福建医科大学硕士学位论文2万方数据福建医科大学硕士学位论文目录缩略词……………………………………………………………1中文摘要…………………………………………………………2英文摘要…………………………………………………………4前言………………………………………………………………6材料和方法………………………………………………………7结果………………………………………………………………15讨论………………

3、………………………………………………29全文小结…………………………………………………………32参考文献…………………………………………………………32致谢………………………………………………………………37文献综述…………………………………………………………38攻读学位期间发表的论文………………………………………503万方数据福建医科大学硕士学位论文缩略词英文缩写英文全称中文全称ATarrivingtime始增时间Biobiotin生物素BASbiotin-avidinsystem生物素-亲和素系统B

4、NHS-ester(+)-BiotinN-hydroxysuccinimideester生物素-N-羟基琥珀酰亚胺酯CAMchickChorioallantoicMembrane鸡胚尿囊膜CEUScontrast-enhancedultrasonography超声造影DSPCdistearoylphosphatidylcholine二硬脂酰磷脂酰胆碱ESendostatin血管内皮抑制素ELISAenzymelinkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附试验FITCfluoresceini

5、sothiocyanate异硫氰酸荧光素HUVEChumanumbilicalveinendothelialcells人脐静脉内皮细胞MBsmicrobubbles微泡PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液rh-ESrecombinanthumanendostatin重组人血管内皮抑制素ROIregionofinteresting感兴趣区TTPtimetopeak达峰时间TICtime-intensitycurve时间-强度曲线UCAultrasoundcontrastagen

6、t超声造影剂VEGFvascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子1万方数据福建医科大学硕士学位论文携重组人血管内皮抑制素脂质微泡的制备、表征及抗血管生成初步研究中文摘要目的：用生物素-亲和素桥接法制备携重组人血管内皮抑制素脂质微泡，并考察其相关性能，初步探讨其抗血管生成作用。方法：1.采用机械振荡法制备脂质微泡，生物素-亲和素桥接法将重组人血管内皮抑制素连接到脂质微泡上；光学显微镜观察载药微泡的形态、粒径及分布，荧光显微镜鉴定，ELISA检测微泡载药量；2.建立小鼠肝癌

7、H22皮下移植瘤模型，随机分为载药微泡组与SonoVue组进行超声造影，对比载药微泡与SonoVue的造影效果及造影参数差异；3.采用灌注消化法原代培养人脐静脉内皮细胞，免疫组化法鉴定HUVEC细胞Ⅷ因子相关抗原表达情况；4.MTT法检测重组人血管内皮抑制素对HUVEC增殖的抑制作用；5.体外培养HUVEC，分为重组人血管内皮抑制素组、重组人血管内皮抑制素+超声辐照组、载药微泡+超声辐照组，分别于处理后1h、2h裂解细胞，ELISA测定细胞内rh-ES含量，观察不同处理对细胞摄取药物的影响；6.鸡胚随机

8、分成7组：重组人血管内皮抑制素组低、中、高剂量组、单纯载药微泡组、重组人血管内皮抑制素+超声辐照组、载药微泡+超声辐照组、生理盐水对照组，处理48h后分析尿囊膜血管生长情况。结果：1.采用生物素-亲和素桥接法成功制备了携重组人血管内皮抑制素脂质微泡，8微泡密度约（5.2士0.1）×10/mL，平均粒径为(3.0士0.4)μm，不低于882.4%的微泡直径在2～7μm范围内；ELISA测得每10微泡载药量为（800±70.53）μg。2.小鼠