sd大鼠颞下颌关节骨关节炎模型的建立

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1、温州医学院硕士学位论文用苯巴比妥钠(37．8mg／kg)麻醉后常规备皮消毒双侧n叮区，取0．1ml弗氏完全佐剂进行实验组SD大鼠双侧nU关节腔内注射，诱导颞下颌关节OA的发生。分别于注射后l周，2周，4周时手术摘取SD大鼠双俱lJTIdJ组织标本。4指标的检测以下各指标检测均为按随机法从对照组，实验组1周，实验组2周和实验组4周中抽取10只SD大鼠为指标检测对象。4．1动物观察实验中观察实验动物的TMJ有无红肿以及程度，食欲有无下降，体重有无改变。4．2关节炎的判断标准关节炎指数阳1(arthr

2、itisindex，AI)评定采用关节炎评分法(0-4级)。0分：无关节炎；1分：关节有红色斑点或轻度肿胀；2分：关节中度红肿；3分：关节重度红肿；4分：关节严重红肿且不能负重，(本实验可改为TMJ严重红肿且影响咀嚼)。4．3病理组织切片和观察方法石蜡标本制成4am厚(其中Mankin’s评分的切片为6Ilm厚)的切片，HE染色。镜下描述滑膜组织病理改变，TUNEL法检测软骨及滑膜细胞凋亡情况，Mankin’s评分原则为切片评分。4．3．11rIn虹L法积分标准TUNEL法检测软骨及滑膜细胞凋亡

3、情况，并计算凋亡指数：每例切片计数7个400倍视野，以平均每100个细胞中含凋亡细胞个数作为凋亡指数。4．3．2Mankin’s评分4．3．2．1TMJ软骨大体观察观察TMJ有无关节积液和滑膜肿胀，在解剖显微镜下对关节面的病理改变进行观察。大体观察按以下标准评分：offf：关节面光整，色泽如常；1分：关节面粗糙，有小的裂隙且色泽灰暗；2分：软骨缺损深达软骨中层；3分：关节面溃疡形成，软骨缺损深达软骨深层；4fff：软骨剥脱，软骨下骨质裸露。4．3．2．2光镜观察矢状位切取约3film厚带软骨下骨

4、质的软骨标本，置于4％多聚甲醛固定24h，15％EDTA脱钙4周，常规脱水、浸蜡后石蜡包埋，69m连续切片，行苏木精一伊红染色及番红花红o-固绿(safranin0-fastgreen)染色，后者染色浓度1％，染色时间为6min，由2位独立的观察者按表1Mankin’s评分原则为切片评分，取两者平均值作为Mankin’s得分嘲。7温州医学院硕士学位论文各组大鼠关节软骨组织在光镜下的观察均在专业指导老师的指导下完成，并由一位资深专业老师对观察结果进行评估、总结。本实验设计、实旌、评估者，均经过正规

5、培训。5统计学分析：由第一作者使用SPSS11．0软件进行数据处理，对以下三个观测指标进行统计学分析，所有参数均以趸±s表示。关节炎指数所得数据用均数±标准差(嚣±s)表示，统计学分析采用双样本等方差假设的t检验法，以P

6、A注射后，实验组l周时有2只动物TMJ处出现中度红肿，其余6只轻度红肿，2只没有明显红肿出现；实验2周时组红肿均加重；实验组4周时SD大鼠关节肿胀度达高峰。实验组l、2和4周时SD大鼠均出现体重下降、食欲下降等关节外症状，但无SD大鼠死亡情况。正常对照组则无任何异常变化。2关节炎指数(AI)实验组SD大鼠在CFA注射后均出现不同程度关节肿胀以及影响咀嚼情况，且以上症状且随着造模时间延长逐渐加重。大概在注射后4周时出现肿胀高峰，以后无明显加重，见表2。8温州医学院硕士学位论文表2实验组与对照组关节

7、炎指数比较(n=10)实验组2周与实验组1周相比，p<0．05实验组4周与实验组2周相比，p<0．05注幸与对照组相比，p<0．053滑膜组织病理改变TMJ滑膜组织可分为固有层和滑膜下层。固有层为细胞内膜，通常由卜4层滑膜细胞构成，其下方并无基底膜样结构，细胞间为无定形间质，不含纤维。滑膜下层为疏松结缔组织，含有血管和神经以及成纤维细胞、巨噬细胞、肥大细胞、脂肪细胞等细胞成分。滑膜固有层与滑膜下层无明显界限¨∽。TMJ关节腔注射CFA滑膜组织出现病理改变。正常组滑膜组织，镜下：滑膜组织正常，滑膜

8、细胞排列规则，未见淋巴细胞和单核细胞浸润，未见纤维组织增生，见图1。模犁组滑膜组织，镜下：滑膜组织充血，水肿，滑膜细胞排列不规图1：正常组滑膜组织与软骨细胞HE染色光镜200×9温州医学院硕士学位论文图2：实验组滑膜组织HE染色光镜200×图3：实验组软骨组织HE染色光镜200×lO温州医学院硕士学位论文图4：实验组软骨组织HE染色光镜400×4细胞凋亡4．1大体标本解剖显微镜下早期关节软骨失去光泽，变软呈灰黄色，在关节承重部位出现不规则压迹，可见麻点样小窝或线形裂隙；后出现糜烂与溃疡；后期软骨