转抗盐基因中天杨新品种扦插育苗耐盐试验

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1、http://www.paper.edu.cn1）转抗盐基因中天杨新品种扦插育苗耐盐试验尹建道张洪岭王立霞（天津理工大学，天津，300191）（天津市宁河苗圃场）﹡孙仲序王淑英杨进军（山东农业大学）（天津理工大学）摘要利用滨海盐碱土配制营养基质，采用盆栽扦插的方法，对转抗盐基因（mtl-D基因）中天杨新品种的耐盐能力、生长表现和根系发育状况进行了对比试验研究，结果表明：随着土壤含盐量的增加，插穗存活率降低，生长量减少，仅2‰盐度试验组生长正常，叶色浓绿，存活率一直保持在90％以上，4‰以上盐度试验组均因盐害而陆续枯死；土壤盐害首先作用于皮部侧根，表现为新生皮部根褐变坏死，导致枝

2、叶发黄、萎蔫，并逐渐干枯死亡；扦插育苗前期，转基因中天杨与对照的耐盐能力和生长表现并无明显差别，其原因可能与插穗中外源基因的表达过程有关。关键词中天杨；转基因植物；盆栽试验；扦插育苗；耐盐性分类号S722.36杨树（populusspp.）是我国北方地区的主栽树种之一，也是最早开展基因工程研究的模式树种之一，一些功能基因已被成功导入杨树的细胞[1，2]基因组中，如转Bt基因抗虫欧洲黑杨植株、转AaIT基因抗虫杨树植株[3]等。针对我国盐碱地面积大、开发利用困难的现状，刘风华、孙仲序等[4]人用PCR方法克隆了大肠杆菌1-磷酸甘露糖醇脱氢酶基因（mtl-D），利用土壤农杆菌介导法

3、导入八里庄杨（Populus×xiaozhannica,cv.“Balizhuangyang”），经卡那霉素筛选、分子鉴定和Northern杂交等程序，证明外源基因已整合到染色体上，并且有转录，获[5]得了一批具较高抗盐性的转化植株。在抗盐性检测方面，孙仲序等人在[6]实验室内进行了组培、水培、盆栽3个方面的抗盐性鉴定，尹建道等人在滨海盐碱地区进行了田间造林对比试验，均证明转化植株的耐盐能力较对照有明显提高。目前，该转化植株已被正式定名为“中天杨”，并被国家1).天津市教委科技发展基金项目（021211）和教育部留学回国人员科研启动基金资助项目。第一作者简介：尹建道，男，195

4、9年8月生，天津理工大学环境科学学院，教授，博士。＊通讯作者：孙仲序1http://www.paper.edu.cn林业总局认定为“植物新品种”重点推广，为我国盐碱地区的造林绿化提供了一条新途径。扦插育苗是杨树扩繁的主要方法，也是杨树大面积栽培和新成果推广应用的前提条件，扦插繁殖环节至关重要。为了对比鉴定转抗盐基因中天杨新品种在扦插育苗环节的耐盐能力和生长表现，我们采用盆栽试验的方法进行了研究，旨在为生产应用提供理论依据。1、材料与方法1．1试验材料：选用中天杨田间对比试验林当年萌生枝剪取插穗，长度15cm左右、粗度0.8～1.0cm，分为转基因中天杨和对照八里庄杨两个品种，秋

5、末落叶后同时剪取，沙藏备用。1.2试验方法：试验在天津市宁河苗圃场的玻璃温室内进行，以免降雨时淋洗土壤盐分。扦插基质选用现地的自然土壤配制，一类是含盐量很高的盐土，一类是含盐量较低的苗圃土壤（淡土），两者各取一定的比例，按照配制前后盐分重量相等和土壤总重量相等建立二元一次方程组，即可求解配制某一目标含盐量（g/kg）时的盐土、淡土重量比例（见表1），并按各自的自然含水率换算成自然土重量，称重后充分混合均匀，即为所需要的盐分梯度系列扦插基质。[注]表1转基因中天杨盆栽扦插育苗耐盐实验扦插基质的配制目标含盐量风干土总重风干土重量/kg自然土重量/kg扦插基质-1/g.kg量/kg盐

6、土淡土盐土淡土总重量/kg21203.28116.723.48136.51139.9931205.62114.385.97133.77139.7441207.97112.038.46131.03139.49612012.65107.3513.43125.55138.98〔注〕：经测定分析，盐土的全盐量为51.82‰，pH值为8.11，自然含水率5.8％；淡土的全盐量为0.6‰，pH值为8.10，自然含水率14.5％将扦插基质装入塑料花盆内，每盆重5.4kg，共20盆。其中10盆用于2http://www.paper.edu.cn扦插转基因中天杨新品种，10盆用于扦插对照八里庄杨

7、，以便对比观测各自的耐盐能力和生长表现，花盆下垫托盘、分区摆放并标记。其余的扦插基质装盆后作为根系观察之用。4月1日扦插，每盆3株，重复10次，插后浇水，以保持土壤湿润为宜，以后每2周浇水1次，同时观测记载插穗生根和苗木的生长情况，直到生长稳定的6月底结束。2、结果与分析2.1插穗在不同盐度条件下的生长表现杨树是扦插易活树种，生根和发芽只是插穗成活的最初表现，在适宜的温度、湿度、光照条件下，插穗依靠自身储存的营养和能量都能完成这一过程，但是，新根能够忍受盐胁迫并正常发挥吸收功能才会使这一过程