高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏mfn2表达与线粒体功能

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1、河北医科大学硕士学位论文高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏Mfn2表达与线粒体功能姓名：朱春景申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：宋光耀201203中文摘要高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏Mfn2表达与线粒体功能摘要一目的：研究高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏中线粒体融合蛋白2(Mitofusin2：Mfn2)的表达及线粒体结构和功能的变化情况；以明确Mfn2的表达与线粒体结构、功能的关系，为研究胰岛素抵抗的分子机制提供实验依据。．一．～⋯方法：本研究以4周龄SD大鼠为研究对象，‘适应性喂养l周后随机分为正常饮食组20只和高脂饮食组20只。1通过高脂饲料喂养SD大鼠构建

2、胰岛素抵抗的动物模型：正常饮食．组给予普通饲料(热量组成：脂肪10．3％，蛋白质24．2％，碳水化合物65．5％，总热量为348kcal／100g)；高脂饮食组给予高脂饲料(热量组成：脂肪59．8％，碳水化合物20．1％，蛋白质20．1％，总热量为501kcal／100g)曩+’．．一，，2在喂养4周时，每组随机选取lO只大鼠行高胰岛素正葡萄糖钳夹实验检测胰岛素抵抗程度，钳夹实验结束后进行下述指标检测d‘2．1常规指标检测：采用葡萄糖氧化酶法测尾尖空腹血糖；采用酶联免疫法测血清中空腹胰岛素的水平：采用生化法测血清中胆固醇和甘油三酯的含量。2．2线粒体结构功能检测：

3、采用HE染色观察肝脏细胞形态变化；采用透射电镜观察肝脏线粒体结构变化；采用比色法测定肝脏组织线粒体悬液中琥珀酸脱氢酶和细胞色素C氧化酶的活性。r．一2．3Mfn2检测：采用Real-timeRT-PCR检测肝脏中线粒体融合蛋白2的mRNA表达情况；采用Westernblot检测肝脏中线粒体融合蛋白2的蛋白含量。3继续喂养剩余的大鼠到8周时，再次行高胰岛素正葡萄糖钳夹实验检测胰岛素抵抗程度，钳夹实验结束后处死剩余的大鼠，重复上述指标检测。结果：一：’■～中文摘要‘。二’一一1喂养4周后高胰岛素正葡萄糖钳夹实验结果显示；高脂饮食组葡萄·糖输注率24．254-0．87m

4、g／(kg．min)低于正常饮食组25．20圭0．61mg／(kg．min)，差异有统计学意义(P0．05)；高脂饮食组空腹胰岛素的含量28．084-0．65mU／L高于正常饮食组26．30-士0．85mU／L,差异有统计学意义(尸一

5、；两组体重差异仍无统计学意义(尸>o．05)；高脂饮食组空腹血糖的水平5．09士o．15mmo儿。高于正常饮食组：4．85士0．09mmol／L，差异有统计学意义(P

6、L，差异有统计学意义(尸<0．01)。．～⋯～⋯一4。‘一■■’’：。·。一3肝脏HE染色结果显示：4周时正常饮食组中肝细胞形态正常，体积正常；高脂饮食组肝脏细胞部分出现脂肪变性，细胞体积有所增大，胞‘质中可见部分空泡变性。8周时正常饮食组中肝细胞形态及体积均正常，未见炎性细胞浸润；高脂饮食组肝脏细胞出现弥漫性脂肪变性，以中央静一脉区最为明显，细胞体积增大，胞质中可见空泡变性，中央静脉区可见炎性细胞浸润。··‘⋯⋯一一’4肝脏透射电镜结果显示：4周时正常饮食组肝细胞中线粒体内外膜清晰可见，线粒体嵴形态正常，排列规则，胞质中未见脂滴；高脂饮食组肝细胞胞核周围可见散在

7、脂滴，线粒体内外膜清晰可见，线粒体嵴出现部分融合。8周时正常饮食组肝细胞中线粒体形态清晰可见，线粒体内外膜清晰可见，线粒体嵴形态正常；～高脂饮食组肝细胞胞核周围可见体积较大’的脂滴，线粒体内外膜出现部分或全部融合，线粒体嵴全部消失，呈现空泡化表现。‘．-．+一⋯‘一’．-。二：0．，‘‘5反映线粒体功能的两个关键酶活性测定结果：耷局时高脂饮食组琥4珀酸脱氢酶的活性9．2034-1．549U／rag．prot，低于正常饮食组琥珀酸脱氢酶一中文摘要．一的活性11．7954-1．829U／mg．prot，差异有统计学意义(P

8、．368土