弓形虫感染与nlrp3炎症小体相关性的初步研究

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1、安徽医科大学AnhuiMedicalUniversity硕士学位论文弓形虫感染与NLRP3炎症小体相关性的初步研究ThePreliminaryStudyofcorrelationbetweenToxoplasmagondiiinfectionandNLRP3inflammasome作者姓名方潮指导教师王中新教授申请学位医学硕士专业名称临床检验诊断学论文工作时间2011年06月-2013年03月2013年03月学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究及取得的成果。据我所知，除了

2、文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了说明并表示谢意。学位论文作者签名日期学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定：学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。愿意将本人的学位论文提交《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位

3、论文全文数据库》和《中国学位论文全文数据库》中全文发表，并可以以电子、网络及其他数字媒体公开出版，并同意编入CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》中使用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名：导师签名:日期：日期：安徽医科大学硕士学位论文目录中英文缩略词对照表………………………………………………………………………4中文摘要…………………………………………………………………………………………6英文摘要……………………………………………………………

4、……………………………71前言………………………………………………………………………………………………92材料与方法…………………………………………………………………………………122.1实验材料…………………………………………………………………………………122.1.1昆明鼠……………………………………………………………………………………122.1.2弓形虫……………………………………………………………………………………122.1.3细胞株……………………………………………………………………………

5、………122.1.4半定量PCR引物……………………………………………………………………122.1.5主要仪器及来源……………………………………………………………………132.1.6主要试剂………………………………………………………………………………142.1.7主要试剂配制…………………………………………………………………………152.2实验方法…………………………………………………………………………………192.2.1弓形虫速殖子获取…………………………………………………………………192.2.

6、2THP-1细胞复苏……………………………………………………………………192.2.3弓形虫速殖子感染THP-1细胞………………………………………………192.2.4THP-1细胞总RNA的提取……………………………………………………192.2.5THP-1细胞中NLRP3和caspase-1mRNA半定量PCR测定……202.2.5.1逆转录合成第一链cDNA……………………………………………………202.2.5.2DNA片段扩增……………………………………………………………………212.2.5.

7、3琼脂糖凝胶电泳…………………………………………………………………212.2.6THP-1细胞中NLRP3和caspase-1蛋白westernblot测定………222.2.6.1NLRP3和caspase-1蛋白样品制备………………………………………222.2.6.2SDS-PAGE电泳…………………………………………………………………222.2.6.3转膜……………………………………………………………………………………231安徽医科大学硕士学位论文2.2.6.4封闭………………………………………

8、……………………………………………232.2.6.5孵育NLRP3和caspase-1一抗………………………………………………232.2.6.6孵育二抗……………………………………………………………………………232.2.6.7显影……………………………………………………………………………………232.2.7THP-1细胞上清中IL-1β和IL-18ELISA测定…………………………242.2.8弓形虫速殖子感染小鼠…………………………………………………………252.