重组色素上皮衍生因子对氧诱导大鼠视网膜新生血管生长抑制作用论文

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1、硕士学位论文重组色素上皮衍生因子对氧诱导大鼠视网膜新生血管生长的抑制作用研究生：魏二霞导师：柯晓云副教授摘要研究背景早产儿视网膜病变(retinopathyofprematurity，ROP)已经成为全世界范围内致盲的重要原因，主要由于未成熟儿视网膜发育不完善，在多种因素影响下视网膜缺血，进一步造成视网膜新生血管形成，然后导致增殖性视网膜病变。视网膜新生血管形成后可发生渗出，出血，增殖膜等一系列病变，使眼球的结构和功能受到严重的损害。．ROP的治疗主要是激光光凝术和冷冻手术，晚期的患者行玻璃体切割术，

2、手术治疗虽然可控f括JJROP的病程，防止严重并发症，但治疗效果仍不理想，只是延缓病变的进展，在治疗过程中破坏了视网膜组织，导致视功能的永久性损害。ROP的发生与视网膜新生血管有密切关系。但新生血管增殖的机制不明，新生血管的形成是一及其复杂的生物过程。研究发现血管内皮生长因为与视网膜新生血管形成密切相关，视网膜新生血管性疾病均存在这视网膜组织血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)生成增加。而抑制视网膜组织VEGF的表达，能够使视网膜新生血管形成减少

3、。VEGF作为一种血管生成刺激因子被认为在ROP血管形成中起到重要的中心调控作用，而色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor，PEDF)是VEGF的非特异性抑制剂。两者在视网膜血管病变中有着密切的关系。在缺氧的视网膜中，PEDF的含量会下降，VEGF的含量增多。摘要PEDF的产生和分布是很广泛的，成人眼内的PEDF存在于角膜，房水，玻璃体，视网膜等，主要由视网膜色素上皮分泌而来。PEDF不仅能够影响视网膜分化，发育和成熟，还有神经元保护作用，具有神经营养和抗新生

4、血管的作用。PEDF是目前最强大的新生血管再生抑制因子之一。另外它只针对异常新生血管而不抑制正常存在血管，而且，PEDF的神经营养和保护作用，对比可能损害神经的抑制药物或生物因子来说，更占优势。因而PEDF具有广阔的临床应用前景。PEDF还具有抗氧化作用，这些因素都是早产儿视网膜病变的主要因素，所以可以想象PEDF在预防和治疗早产儿视网膜病变的新生血管形成及进展方面的作用。因此，我们的实验通过不同的氧气浓度建立合适的氧诱导视网膜病变(oxygeninducedretinopathy，OIR)模型，模拟

5、人类未成熟儿视网膜病变，观察VEGF与视网膜新生血管之间的关系，采取PEDF两种不同的注射方式(结膜下、玻璃体腔)治疗，观察PEDF对视网膜新生血管的抑制作用及对正常视网膜血管的影响，力图寻找一种简便、安全、有效的途径，为未成熟儿视网膜病变药物治疗提供新的方法和思路。第一部分不同吸氧浓度对新生鼠视网膜血管发育和血管内皮生长因子表达的影响目的观察不同氧浓度环境在新生鼠视网膜病的作用，建立符合早产儿视网膜病变病理特点的动物模型，为研究该病的发病机制及治疗提供实验基础，利用视网膜血管ADP酶染色及组织切片观

6、察大鼠视网膜形态及病变程度。分析新生鼠视网膜及氧诱导视网膜病变中VEGF蛋白质表达的变化。方法将新生鼠40只，与母鼠共同饲养，将其分为空气组；波动组1：50％---20％；波动组2：40％'--"10％；波动组3：50％-～10％四组，每组各10只。正常空气组J下常空II硕士学位论文气中饲养18d，波动组l，放入50％0：24h，20％24h，循环七次，共14d，后放入空气饲养4d，波动组240％0：24h，10％24h，循环七次，共14d，后放入空气饲养4d，波动组3放入50％0：24h，10％24

7、h，循环七次，共14d，后放入空气饲养4d。18的时，每组各取6只大鼠左眼，行视网膜铺片ADP酶染色观察视网膜血管形态的发育，钟点法评价视网膜新生血管严重程度；每组各取6只大鼠右眼，制作眼球病理切片，常规HE染色计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核定量分析视网膜新生血管增生情况，比较各组间的差异。各组剩余视网膜组织，利用Western—blot检测视网膜血管内皮生长因子VEGF蛋白的表达。统计分析：所有数据均依据SPSSl3．0统计软件包进行分析，实验测试指标的数据资料以x±s表示；采用One．WayAN

8、OVA分析数据，方等齐时组问采用LSD法，方差不齐时组间多重比较采用DunnettC法，P<0．05作为差异有显著性意义。结果视网膜铺片ADP酶染色：正常空气组新生鼠在18d时视网膜血管发育基本成熟，管径较粗，’全视网膜分深浅两层，浅层自视盘发出，向四周呈放射状均匀分布，深层呈多角形网状形态；波动组l视网膜血管发育基本『F常；波动组2，3视网膜血管扩张迂曲，中央见无灌注区，血管发育未达视网膜周边部，有大量新生血管形成，血管密度增高，新生血管网结构紊乱，有