漠斑牙鲆繁殖生理特性及促性腺激素分子克隆地研究

《漠斑牙鲆繁殖生理特性及促性腺激素分子克隆地研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、漠斑牙鲆繁殖生理特性及促性腺激素的分子克隆研究学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了

2、解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日漠斑牙鲆繁殖生理特性及促性腺激素的分子克隆研究摘要本研究以漠斑牙鲆（Paralichthyslethostigma）为研究对象，运用组织学方法、

3、数量形态测量法、酶联免疫双抗体夹心法测定（ELISA）、cDNA末端快速扩增（RACE）技术和半定量PCR法对漠斑牙鲆亲鱼卵巢年周期发育成熟的生理特征、血浆性类固醇激素和促性腺激素表达水平的周年变化规律、促性腺激素FSHβ亚基和LHβ亚基的克隆及其在生殖调控中的生理作用机制等进行了全面研究，初步认识了人工养殖条件下漠斑牙鲆亲鱼的繁殖生理和内分泌特性，为构建稳定的漠斑牙鲆人工繁育技术提供了理论支撑和技术依据。相关研究结果如下：1.漠斑牙鲆卵巢年周期发育规律组织学观察表明，漠斑牙鲆属于一年一次成熟、性腺

4、非同步发育分批产卵类型。生活史中，卵母细胞按其组织学特点可分为6个时相,卵巢发育依据其形态特征可划分为相应的6个时期。达性成熟年龄的雌性亲鱼年周期发育过程中仅可见5个不同发育时相的卵母细胞，卵巢的年发育周期可相应分为5个时期。卵巢年周期发育过程中,亲鱼的性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)和肥满度(CF)发生变化,表现出与性腺发育的组织学特征协同一致的变化规律。其中，GSI值在12月份达到最大值20.87，在6月份达到最低值1.06。HSI值在11月份达到最大值4.92，在12月份达到最低值1.1

5、4，CF值在11月份达到最大值2.27。本研究揭示了漠斑牙鲆卵巢的年周期发育规律，包括卵巢形态变化、卵母细胞组织特征变化和卵巢发育的数量特征变化，认识了漠斑牙鲆卵巢年周期发育的生理和数量形态特征。2.漠斑牙鲆雌鱼血浆性类固醇激素及促性腺激素表达水平的周年变化采用ELISA测定方法测定了漠斑牙鲆卵巢年周期发育过程中血浆性类固醇激素-雌二醇（E2）、睾酮（T）、孕酮（P）表达水平和促性腺激素-促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH）表达水平的变化。结果表明：漠斑牙鲆血浆中性类固醇激素的含量表达水平呈现季节性

6、变化的规律且与性腺发育密切相关。漠斑牙鲆血浆中E2、T、P、FSH和LH的表达水平的周年变化各不相同，表达水平曲线中都出现了两个峰值。其中，E2的表达水平在6月份和12月份分别出现一个高峰，6月份表达水平最大值为7.43pg/mL，12月份表达水平最大值为6.67pg/mL，其他月份E2表达水平均保持相对较低水平，最低值出现在繁殖期末期的2月份，血浆E2表达水平I含量仅为4.34pg/mL。4-6月份和10-12月份血浆E2表达水平逐渐升高，整体趋势与温度变化趋势保持一致，在一定范围内随着温度的升高

7、血浆中E2的表达水平逐渐升高。水温调节对血浆中E2的表达水平影响差异极显著并与其呈正相关关系。漠斑牙鲆血浆中T表达水平的周年变化不大，最高值出现在繁殖期前的11月份，最高表达水平达377.84pg/ml，表达水平最低值出现在繁殖期结束后的3月份（307.24pg/ml）。水温调节对血浆中T的表达水平影响差异不显著并与其呈正相关关系。血浆中T的表达水平比E2表达水平提前一个月达到高峰，可能是因为T和E2在芳香化酶的作用下相互转化引起的。漠斑牙鲆血浆中孕酮的表达水平周年变化明显，表达水平峰值出现在7月份

8、和1月份，峰值分别为23.76ng/mL和23.54ng/mL，表达水平最低值出现在3月份，浓度为14.88ng/mL。漠斑牙鲆血浆中P的表达水平峰值出现时间都比E2表达水平峰值出现时间晚一个月。统计分析表明，水温调节对血浆中P的表达水平影响差异不显著并与其呈负相关关系。血浆FSH表达水平周年变化明显，表达水平峰值出现在7月份和1月份，峰值分别为6.37IU/L和5.31IU/L。而LH表达水平周年变化明显，表达水平峰值出现在6月份和12月份，峰值分别为20.71IU