嗜线虫真菌duddingtonia+flagrans厚垣孢子生产的初步研究

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1、第21分会场生物技术产业化455一——————自——#———女——————#————=——#—————————∞———∞——≮4赵有璋．中国绒山羊的成就和发展．1995，55俞渭江．生物统计附实验设计．北京：中国农业出版社，2001作者简介吾布力·沙迪克，维族。1983年毕业于新疆八一农学院畜牧兽医专业(本科)，现在本校任教。1995～1997年在中国农业大学研修，19981999年在日本带广畜牧大学合作研究一年，2001年参加中国农业工程学会畜牧工程分会。电话：0991—8762675，手机：13899912664，传真：0991—8762

2、603：E—mail：Email／XYDK@xjan．Edu．cm。嗜线虫真菌Duddingtoniaflagrans厚垣孢子生产的初步研究王治才王琳李建军玛利亚姆杨学云新疆畜牧科学院兽医研究所，乌鲁木齐，830000摘要对具有动物胃肠道线虫病生物防制潜力的嗜线虫真菌(Duddingtoniaflagrans)进行了最适生长温度、厚垣孢子生产用培养基、培养基pH值、培养基基质装量与培养容器比值对厚垣孢子生产的影响进行了研究，并用生产的厚垣孢予进行了捕食绵羊粪便中感染性幼虫的体外试验。试验结果表明，该茵在15～30℃之间均可生长，但以25～30

3、℃生长最佳。以小麦为培养基质，分另1j加7种不同培养液进行比较，加PES和TRS两种培养液的培养基孢子产量最高。该菌在pH3～10的培养基中均可产生孢子，但以pH6．5～7时孢子产量最高，培养容器与培养基基质装量比值O．20-0．24时，最利于孢予形成。试验表明该茵可使绵羊粪便中的感染性幼虫减少91％。关键词嗜线虫真茵厚垣孢子生产胃肠道线虫生物防制动物胃肠道线虫病是造成放牧牛羊生长减缓、抗病力下降、生产成本增大的主要原因。常规防制技术主要依靠化学药品定期驱虫。由于长期、大量的使用抗寄生虫的药物，使寄生虫的抗‘药性不断增强，防治效果逐年下降。此

4、外，随着科技意识的提高，人们对使用化药所造成的畜产品药物残留、环境污染更加关注。研究开发绿色、安全的寄生虫生物防治技术和产品是解决该问题的方法之一。用嗜线虫真菌进行动物胃肠道线虫病的防治，就是这种生物防治研究中最具有应用前景的技术之一。国内外一些研究及应用试验也证明了该技术在防治家畜胃肠道线虫病中的应用效果。在应用嗜线虫真菌防治动物胃肠道线虫病研究中，具有良好嗜线虫性能的菌株和经济有效的生产用于生物防治的嗜线虫真菌厚垣孢子，是该技术的关键之一。目前有关嗜线虫真菌(Duddingtoniafla．gran)厚垣孢子的生产研究报道很少，为解决该真

5、菌孢子生产技术，我们对D．flagrans厚垣孢子生产用培养条件、培养基和培养方法进行了初步研究，现将结果报告如下。一、材料与方法(一)材料1．试验用菌种嗜线虫真菌菌种(Duddingtoniaflagrans)来自丹麦皇家兽医与农业大学FAO实验寄生虫学中心，456以科学发展观促进科技创新(下)：—∞∞#—g==；———==—；=≈==g=——————=—=——；=≈《∞∞=#==#=#一由M．1arshen博士惠赠。菌种用CMA琼脂培养到大量厚垣孢子生成，刮取培养物放入20％甘油PBS中，置于1．5mLEpendorf直管，Parafil

6、m膜封El后分别置于一20"C和液氮保存。2．试验用培养基和培养条件种子用CMA或wA琼脂平板培养。孢子生产以新疆自产小麦为培养基基质，分别用改良Czapeks(CZS)和自制PES、TRS、MYS、MES、TwS为营养液按比例加入，26E静置培养。3．试验用虫卵采自然感染或人工感染羊粪便。粪便中克粪便虫卵数达450以上。(二)试验方法1．菌种的复苏将冷冻保存的菌种取出置45℃温水，融化后用接种环取少许接种于CMA琼脂平板中央，Parafilm膜封口后置26℃培养2～3周。2．合适生长温度的测定CMA琼脂平板18块，为6组，每组3块。取直径8

7、ram左右上述培养物一块，分别接种于CMA琼脂平板中央并封口，分别置于10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃培养。5天后，分别测量从接种点中心到菌落边缘的半径，菌落半径最大者为最佳生长温度。3．适合厚垣孢子生产用培养基的筛选称取定量基质，放入250mL三角瓶内，按同一比例加入不同培养液，151b高压20min，放凉后每瓶接人5ram×5ram的CMA培养物4～5块，摇匀后置26℃培养。培养3d后，每周振摇2次，使其均匀生长。培养4周后，将培养物倒出，窒温干燥后分别进行孢子计数。4．培养液pH对孢子生产的影响将装有定量基质的18个三角瓶

8、分为6组；将筛选出的合适培养液用0．1NHCI或NaOH调pH分别至pH3、pH4．5、pH5．5、pH6．5～7、pH8．5、pill0，分别加入各组培养瓶，接种