龙军真菌讲稿2精品医学ppt课件

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1、真菌药敏试验及真菌药敏判断标准解读真菌药敏试验微生物实验室检查进展直接涂片培养真菌抗原检测分子生物学技术直接涂片1肠道和口咽部涂片念珠菌是正常人体胃肠道和咽部的正常菌群，所以不能以这些部位涂片见到孢子或培养出念珠菌即作为真菌感染依据必须与临床表现相结合来确定诊断。从支气管肺泡灌洗液检查卡氏肺孢子虫是确诊的重要依据直接涂片2痰和粪便涂片•粪便涂片念珠菌20-30/油镜或占50%以上•痰标本涂片或培养未见细菌，有大量菌丝及孢子。真菌数每油镜视野>20•口腔涂片未见细菌。真菌数>20－25/视野，有菌丝。培养：纯培

2、养真菌•阴道：培养出白色念珠菌。涂片见到菌丝和孢子微生物技术----直接涂片真菌直接镜检阳性所见直接涂片3有意义的涂片结果•机体内部标本如血液、腹水、C5F、脓肿穿刺液等•新鲜尿液见到大量菌丝及孢子•口腔、阴道、支气管灌洗液见到酵母样菌应作培养确定•组织真菌涂片微生物培养技术有意义的真菌培养标本非经口痰标本非插管尿标本血液或其他无菌体液(胆汁、胸腹水、脑脊液）微生物培养技术和进展深部标本（痰、粪、尿、脓、体液、咽拭、尿道及阴道分泌物）标本接种于含氯霉素的沙氏葡萄糖琼脂及科玛嘉念珠菌显色培养基分别置25°C及3

3、7°C培养48小时常见的酵母在科玛嘉念珠菌显色培养基即可报告，鉴定的符合率在95％左右微生物培养技术和进展念珠菌显色培养基（CHROMagarCandida）原理：几种常见念珠菌独特的酶底物与显色基团化学结合用于鉴定95%以上的-白念珠菌（绿、翠绿）-热带念珠菌（蓝）-克柔念珠菌（粉红，模糊有微毛）亦可用于鉴定85%的光滑念珠菌（紫）其它念珠菌呈白色30－37℃培养48h后观察结果此方法经济,但不够准确微生物培养技术和进展如为不显色的酵母，纯化后作API20C或自动微生物鉴定仪YST卡鉴定如为霉菌，应种于察氏

4、琼脂，其对青霉、曲霉及镰刀霉都具鉴定作用CSF和血液种于沙氏葡萄糖琼脂，分别置25°C及37°C，1周,或直接接于血培养瓶中，37°C，1周微生物培养技术和进展无菌部位采集的标本(如血,CSF、胸腹水、关节液等)中分离的任何酵母都必须鉴定到种，均有诊断意义。同一部位反复分离出同一菌种也具重要意义。从非无菌部位(粪、痰、咽拭等)分离到的条件致病菌(如白念珠菌)，如直接镜检大量菌丝(+)，须结合临床认定具致病性血培养注意事项血培养的污染易污染的微生物有时有致病作用吗？对两次不同部位血培养生长出不同微生物微生物对抗

5、生素均敏感微生物快速生长上述情况下应考虑为感染临床实验室工作人员和医生之间应交流血培养排名前10位的临床致病菌血培养标本留取注意事项严格皮肤消毒和瓶盖消毒用安尔碘消毒皮肤，1-2分钟自然干燥用75%酒精消毒瓶塞并风干，以免造成假阴性结果不建议使用真空针将患者静脉与血培养瓶直接相通，以避免培养肉汤返流入血，且难以控制采血量.2小时内送检，如不能可放室温，但要标记血标本留取注意事项推荐使用两到三套血瓶(需氧+厌氧)送检，至少两套抽血时间:寒站时先后抽两套,间隔时间不超过15分钟，以免影响治疗时机真菌培养时间为5天

6、，但双相真菌需2-4周，如马尔尼菲青菌，医生可注明环境污染假阳性不容忽视4-6月和9-10月为医院和外界空气中真菌高密度时期相关分析发现病房的相对湿度和温度与病房真菌浓度高度相关，提示病房湿度和温度控制的重要性仅靠开窗通风更新空气，在真菌高度繁殖时期效果差环境污染不容忽视使用新的消毒装置，实现边消毒，边工作ICU病房空调出、入风口和水龙头表面真菌和曲霉污染最为严重水源也易污染，国外报道有烟曲霉和镰刀菌由水源传播导致免疫抑制患者侵袭性曲霉感染的报道强调无菌操作微生物培养技术---念珠菌《芽管试验》•鉴酵母接种于

7、0.5cc血清中混匀•37℃2h后观察有无芽管形成•须注意与芽孢间的区别?有芽管形成者即为白念珠菌。(98%)微生物培养技术芽管实验阳性(高倍)微生物培养技术《米粉小培养》将无菌载玻片放入无菌平皿(9cm规格)，溶解培养基后倒在玻片上，待凝固后划分或接种待鉴菌种，旁放一温棉球保温，盖上平皿，25℃,48h后取出小培养，加盖玻片后置显微镜下观察。配方：米粉10g，吐温8010ml，琼脂10－20g，蒸馏水1L微生物培养技术白念在玉米吐温琼脂上形成厚膜孢子微生物培养技术商品化的酵母鉴定系统

8、每条反应板含20个小孔，其中19个含脱水的底物(糖)第一孔为空白对照，通过加入待鉴菌悬液，在48h后观察生长情况，判读反应后结果转为7位数的生物型数码，通过查阅密码手册得出鉴定结果?大多数酵母48h内可鉴定，新型隐球菌和毛孢子菌则需72h目前此试剂盒可鉴定16种念珠菌，6种隐球菌和3种毛孢子菌及其它酵母菌共42种微生物检查技术微生物学检查----小结1①合格痰液经直接镜检发现菌丝，真菌培养2次阳性(