龙军真菌讲稿4精品医学ppt课件

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1、分子生物学技术目前缺乏标准化的方法WHite运用实时定量PCR方法对203例血液病患者全血标本进行曲霉检测，结果发现在确诊/高度拟诊的患者中，阳性率为92.3%;与G实验和GM实验及高分辨CT有良好的一致性分子生物学技术台湾学者运用液相芯片技术，基于所有真菌的高度保守序列如18S、28S和高度可变的内部转录间隔区(ITS)，前者用于筛选真菌感染，后者用于菌种的确定，同时对64种真菌进行鉴定，敏感性和特异性均大于97%，1天内完成JClinMic2005,43:3760-3768分子生物学技术存在问题1.外来的污染2.不能有效地区分定植和感染3.不能指导临床何时开始及停止抗真菌治疗真菌的

2、病理检查真菌的病理检查PAS阳性的念珠菌菌丝真菌的病理检查HE染色真菌菌丝真菌的病理检查肺隐球菌PAS阳性组织病理学检查侵袭性曲霉感染：－侵犯血管，引起病变部位的栓塞、出血及坏死－非特异性炎症、化脓性改变或肉芽肿形成组织病理学检查组织内曲霉：－镜下菌丝常呈45°分枝、有隔、透明且粗细均匀,直径约3～6μm,有菌丝反复分枝现象，排列成放松射状或珊瑚状。－有些慢性损害中菌丝常呈不规则扭曲状－特征性的菌丝：诊断曲霉感染最可靠的依据组织病理学检查HE染色呈蓝色略带红色，PAS染色呈红色嗜银染色呈黑色菌丝横切面与孢子的鉴别：－孢子往往成群分布，直径小于菌丝曲菌菌丝甲胺银染色:曲霉球(烟曲霉)毛霉

3、菌的实验室诊断与外界相通部位分离出毛霉菌不一定有意义无菌部位标本阳性培养有意义支气管肺泡灌洗液直接镜检—常用分子生物学技术真菌药敏判断标准解读抗真菌药物敏感试验过去试验方法及存在问题液基稀释法(brothdilution)微量液基稀释法(brothmicrodilution)琼脂混合法（agarincorporation）（即过去广泛使用的药基法）琼脂扩散法(agardiffusion)问题：影响因素过多，结果重复性差美国国家临床试验室标准委员会（NCCLS）方案1982年起美国国家临床试验室标准化委员会（NCCLS）组织专家进行了一系列试验。1992年：NCCLSM27P文件……对念

4、珠菌和隐球菌液基稀释法提出药敏测试标准化方法，属建议性质。1995年：NCCLSM27T文件，属试验性质。1997年：NCCLSM27A文件，属确认性质，加入了微量稀释法1998年：NCCLSM38－P文件…丝状菌微量液基稀释法提案NCCLSM27-A方案酵母菌的液基稀释法抗真菌药敏试验参考方案（ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofYeasts）已批准的标准方法，包括微量稀释法（microdilution)主要适用于：念珠菌和新生隐球菌2002年出版了M27-A2方案NCCLSM38-P方案产孢

5、丝状真菌的液基稀释法抗真菌药敏试验参考方案（ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofConidia-FormingFilamentousFungi）提出的标准方法，微量稀释法主要适用于：如曲霉、镰刀菌、米根霉、波氏假阿利什霉、申克孢子丝菌（菌丝相）等。我们已根据此法，进行了皮肤癣菌的药敏试验2003年推出M38-A方案M44-A方案2004年CLSI出版了<对酵母菌的纸片扩散法抗真菌药物敏感试验参考方案>使用美蓝MH琼脂平板，纸片为Rosco公司生产的各种抗真菌药物纸片M27-A2药敏判读对于酵母菌

6、（念珠菌、新型隐球菌，不适用于其他真菌）：氟康唑:35度、40-50h(隐球菌70-74h)，与生长对照菌比较80%受抑制为判定点如MIC≤8μg/ml报告敏感，≥64μg/ml报告耐药，16-32μg/ml则是剂量依赖敏感光滑、克柔不适用M27-A2药敏判读伊曲康唑的MIC定义同氟康唑如MIC≤0.125μg/ml,提示受试黏膜感染的念珠菌敏感，如≥1μg/ml报告耐药0.25—0.5μg/ml提示为剂量依赖敏感目前无黏膜外的侵袭性念珠菌感染的折点判定标准M27-A2药敏方案的临床意义1）耐药菌株的鉴定与监测：•念珠菌对FCZ的耐药问题日益严重•AIDS患者经FCZ治疗后出现较多白念

7、珠菌的耐药株•MIC值升高，随FCZ剂量增大•分子生物学方法可证实同一菌株产生耐药M27-A2药敏方案的临床意义(2）拓展新的药敏试验方法：•微量稀释法、E-test法等均以M27-A为基础，从不同角度为临床提供更简捷，易推广的药敏试验技术M27-A2药敏方案的临床意义(3)应用于抗真菌新药的研究•评估新的抗真菌药物的抗真菌效果•扩展到丝状真菌药敏试验•以此为基础，对曲霉、镰刀霉、根霉、波氏霉样真菌、孢子丝菌已形成M38-A方案（2003年），