rock2 sirna对自发性高血压大鼠勃起功能的影响

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1、本项目受以下基金资助国家自然科学基金(81070486)四川I省卫生厅科研基金(090214)四川省杰出青年学术技术带头人培育项目(2010JQ0040)目录1ROCK2siRNA对白发性高血压大鼠勃起功能的影响⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．6讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯301．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯332致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343阴茎海绵体硬结症(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35泸州医学院硕士学位论文ROCK2siRNA对自发性高血压大鼠勃起功能的影响摘要目的：阴茎勃起是一个复杂的生理过程。目前已发现多种信号通路与阴茎勃起有关，包括NOS／NO信号通路、RhoA／Rho激酶通路、HO／CO通路和硫化氢通路等。RhoA／Rho激酶可通过钙离子敏感机制参与阴茎勃起过程，使海绵体血管平滑肌收缩，从而影响阴茎勃起。Rho

3、激酶有两种亚型：ROCKl和ROCK2。很多疾病均可引起勃起功能障碍(ErectileDysfunction，ED)，高血压是其中一个重要的病因。本实验研究阴茎海绵体内注射特异阻断ROCK2基因的表达的siRNA后对自发性高血压大鼠(S陬)勃起功能的影响。方法：购买12周龄的WKY及SHR雄性大鼠各30只，随机分为6组，每组10只，A组为WKY对照组、B组为WKY+GFP组、C组为WKY+siRNA组、D组为SHR对照组、E组为SHR+GFP组、F组为SHR+siRNA组。大鼠腹腔注射1％戊巴比妥钠，剂量为50mg／kg，麻醉显效后显露出

4、大鼠阴茎海绵体，使用微量注射器(20u1)，A组和D组作为对照组，B组和E组给予阴茎海绵体内注射20ulGFP(滴度为3×108TU／m1)，C组和F组给予阴茎海绵体内注射20ulsiRNA(滴度为3×108TU／m1)，双侧海绵体内缓慢注射，每侧10ul，注射完毕后保留3分钟，拔出针头后压迫止血。1周后，大鼠腹腔注射1％戊巴比妥钠，剂量为50mg／kg，麻醉显效后，将左侧颈总动脉充分游离并暴露，使用连接好压力感受器的30G针头，充满肝素盐水后穿刺左颈总动脉，RM6240信号系统持续监测记录平均动脉压(MAP)；剪开阴茎背侧正中至耻骨联合

5、上缘的皮肤，腹侧剪至阴囊上方，游离出阴茎。沿腹部正中线打开腹腔，在前l泸州医学院硕士学位论文列腺的后外侧找出盆腔神经节(majorpelvicganglion，MPG)，作为电刺激部位。使用24G针头穿刺右侧海绵体，连接压力转换器，ICP基线稳定后使用不同的电压刺激MPG(电刺激参数：电压3v、5v，波幅5ms，频率12Hz，连续lmin，刺激时间间隔3min)，RM6240系统记录大鼠的海绵体内压／平均动脉压(ICP／MAP)的变化。心脏取血2ml检测血清睾酮值。阴茎海绵体组织冰冻切片，DAPI染色后在荧光显微镜下观察绿色荧光。阴茎海绵

6、体组织制作成组织匀浆，按照一氧化氮合酶试剂盒的说明，使用酶标仪检测一氧化氮合酶(NOS)活性。通过免疫组化和westernblot检测ROCK2、eNOS、p-eNOS在阴茎海绵体内的表达。结果：各组的体重、睾酮值均没有显著差异。ICP／MAP在A组、B组、C组三组两两之间差异均没有显著性，而F组显著高于D组和E组(P

7、要表达在阴茎海绵体平滑肌细胞的胞浆，eNOS主要表达在血管内皮细胞，p-eNOS也主要表达在血管内皮细胞。westernblot检测ROCK2的表达，发现C组显著低于A组和B组(P

8、障碍’泸州医学院硕士学位论文ROCK2siRNAaffectserectilefunctioninspontaneouslyhypertensiverats--objective：Penile