ndrg2基因在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生长的影响

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1、万方数据中图分类号——UDC博士学位论文学校代码lQ533NDRG2基因在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生长的影响ExpressionofNDRG2GeneinGallbladderCarcinomaandItsEffectonGrowthofGallbladderCarcinomaCells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：宋士鹏临床医学基因在胆囊癌中的表达卫生部肝胆肠外科研究中心廖前德教授论文答辩日期型!暨：』：兰2答辩委员会主．’h中南大学2014年4月万方数据学位论文原创性声明IIIIIIIIIIIIIIIIIIIHInllllIIJY268427

2、5本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：∑弛日期：毕年兰月扛日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校

3、可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：：<垂迹歹l12日期：冽L年』卑日一孚乏一』链一￡叠上寝垭签乳碟菇iyj副日万方数据博士学位论文中文摘要NDRG2基因在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生长的影响中文摘要第一章NDRG2在胆囊癌组织中的表达、临床病理和预后意义目的：检测NDRG2蛋白在胆囊良、恶性疾病中的表达强度，并结合相关临床病理资料，分析影响NDRG2蛋白表达的有关因素，初步探讨NDRG2蛋白在胆囊良、恶性疾病发生发展过程中的作用和临床意义。方法：收集内蒙古包钢医院普

4、外科2009年9月至2011年8月手术切除的胆囊癌标本130例及其相应癌旁组织。所以病例术前皆未经过放、化疗及其他辅助性治疗，且必须有完整的住院病历资料。全部标本皆采用常规石蜡包埋切片，免疫组化技术及WesternBlot检测标本中NDRG2蛋白的表达强度。并统计分析病例的相关临床病理资料，对相关因素进行矛检验。结果：①NDRG2蛋白在胆囊癌中的表达明显低于相应癌旁组织(P<0．005)；②NDRG2蛋白在TNMII期中的表达低于在TNMI期中的表达(P=0．003)③有淋巴结转移和浸润的胆囊癌，其NDRG2蛋白阳性率明显低于无淋巴结转移或浸润者(P=O．008)。结论：NDR

5、G2蛋白在胆囊癌中显著低表达，其表达强度与胆囊癌的分期、分级和临床预后有密切关系；从癌前病变发展成胆囊癌的过程中，NDRG2蛋白可能发挥了重要作用，检测其表达强度有助于在癌前病变阶段早期发现胆囊癌。关键词：胆囊癌，免疫组织化学，NDRG2万方数据博士学位论文中文摘要第二章NDRG2真核表达载体构建及稳定转染GBC．SD细胞系的建立目的构建人NDRG2真核表达载体，转染GBC．SD细胞，建立稳定转染的GBC．SD细胞系。方法采用PCR方法，以人胆囊癌组织cDNA文库为模板扩增人NDRG2基因的全长cDNA编码区序列，利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3．1，经

6、酶切和测序鉴定后，用脂质体转染法转染GBC—SD细胞，通过G418筛选，建立稳定转染的GBC．SD细胞系，用RTPCR、Westernblot检测NDRG2的表达。结果构建了pcDNA3．1／NDRG2真核表达载体，建立了稳定转染的GBC-SD细胞系，并成功地表达了目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染GBC．SD细胞系的建立为进一步研究NDRG2的功能奠定了良好的实验基础。关键词：NDRG2；真核表达载体；转染；GBC．SD细胞系；基因表达第三章NDRG2基因对人胆囊癌细胞株GBC．SD生物学特性的影响目的：观察NDRG2重组载体在体内、外对GBC—SD生长的影响，以探

7、讨NDRG2基因与胆囊癌之间的相关性，为探索NDRG2真核表达载体作为胆囊癌基因治疗靶点提供思路。方法：采用MTT及流式细胞术检测GBC．SD、GBC．SD．Ve及GBC—SD—NDRG2三组中细胞周期、凋亡率及细胞增殖等生物学行为HI万方数据博士学位论文中文摘要的变化；将三组细胞接种裸鼠皮下成瘤，建立裸鼠异体移植胆囊癌模型，观察瘤体生长速度及瘤体大小，免疫组化法检测瘤体组织中NDRG2基因的蛋白表达，评价重组载体pcDNA3．1．NDRG2对胆囊癌细胞GBC．SD裸鼠体内致瘤活性及生长活性