应答蛋白基因表达在镉接触中作为生物标志物的研究

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1、yTB9859旦欠学学校代码：10246学号：021102063博士学位论文应答蛋白基因表达在镉接触中作为生物标志物的研究院系：坌茎里竺堂堕专业：姓名：指导教师：完成日期：卫生毒理学常秀丽金泰廪教授2005年4月17目系强瑟轷篁!tj；艾蓥磊’1+幛ACGIHBMD：BMDLBMR：Cd：Cd_MT：ELISA：GFAASH0一l：HEK239THPBLs：MT：UALB：UCr：UM盯：UNAG：u132一MG：文中主要缩略语美国工业卫生联合会(AmericanConferenceofGovernmentalIndustrialHygienists)基准

2、剂量(BenchmarkDose)基准剂量值可信限下限(LowerConfidenceLimitOFITheBenctmaarkDose)基准剂量反应(BenchmarkDoseResponse)镉(Cadmium)镉．金属硫蛋白复合物(Cadmium—Metallothionein)酶联免疫吸附分析(Enzyme—linkedImmunosorbentAssay)石墨炉原子吸收光谱法(GraphiteFurnaceAtomicAbsorptionSpectrometry)血红素氧合酶一l(HemeOxygenase一1)人胚肾细胞(HumanEmbryo

3、Kidneycells)人外周血淋巴细胞(HumanPeripheralBloodLymphocytes)金属硫蛋白(Metallothionein)尿自蛋白(UrinaryAlbumin)尿肌酐(UrinaryCreatinine)尿金属硫蛋白(UrinaryMetallothionein)尿N一乙酰一p—D一葡萄糖苷酶(UrinaryN—Acetyl—D—D—Glucosaminidase)尿p2一微球蛋白(Urinaryp2一Microglobulin)复旦大掌博士生毕业论文应答蛋白基因表达在镉接触中作为生糖r标志糖r的研究应答蛋白基因表达在镉接触中

4、作为生物标志物的研究中文摘要镉(cadmium，Cd)引起的健康危害已受到全球的高度关注，特别是长期低水平接触镉引起的毒性已成为当今研究的重点。寻求敏感、特异的生物标志物是预防镉引起的有害效应的有效措施之一。应答蛋白是在环境与机体交互作用时，细胞受到外界因素的干扰而产生的。应答蛋白的诱导可作为生物标志物(biomarker)。金属硫蛋向(metallothionein，MT)能用镉诱导产生，是镉在体内运输、代谢的主要蛋白，在镉的毒性中起着关键作用。MT作为镉接触标志物的研究越来越多。血红素氧合酶1(haemoxygenase一1，H0一1)作为一种抗氧化损

5、伤的应答蛋白，也有可能作为一种镉致氧化应激的生物标志物。本文应用逆转录多聚酶联反应(RT—PCR)和免疫印迹(Westernblot)观察镉对人胚肾细胞的MT亚型和H0一lmRNA和蛋白的诱导表达作用。同时也观察镉对体外培养的人淋巴细胞MT各亚型的诱导表达作用。并在职业性镉接触人群中检测其变化，初步探讨其在镉接触中作为生物标志物的可行性。并应用适用于人群研究实时荧光定量RT—PCR方法，测定镉接触人群中外周血淋巴细胞的MT一1AmRNA的表达水平。体外实验证实．5pmol／L以上的CdCl：可明显抑制人胚肾细胞的增殖活性，诱导人胚肾细胞发生凋亡(P

6、1)。CdCl。可显著诱导人胚肾细胞MT1A，1E，1F，1G，lH，1x，MT一2A和H0—1mRNA和蛋白的表达，_者表达变化规律一致，具有时间一剂量依赖关系。人外周血淋巴细胞(HPBLs)中MT1各亚型和MT2AmRNAs的基础转录水平从高到低依次为MT一2A，MT一1x，lA，州，lF，lE，lG，而MT1B没有表达。在未引起细胞损伤时，CdC]。可诱导MT一1A，lE，1F，lG，1H，1x，MT2AmRNA的表达水平显著增加(P<0．05)，未见诱导MTlBmRNA表达。对职业镉接触人群，进行接触评定(问卷调查、车间空气镉浓度测定、血镉和尿镉测

7、定)和效应评定(尿K—B—D-氨基葡萄糖苷酶(L'NAG)、尿B。一微球蛋白(u62一MG)、尿白蛋白(UALB)、尿金属硫蛋白(UMT))，分离淋巴细胞，测定MT1A，lE，1F，1X，MT一2A和HO—ImRNA表达水平。研究发现：接触组工人的MT一1A，1E，1F，1x，MT一2A和HO—lmRNA表达水平显著高于对照组(P

8、；因表达在寓‘接触中

9、作为生物标志物☆々研究和HO—lmRNA表达水平有升高趋势，且10