apr3蛋白的亚细胞学定位及其在细胞凋亡和自噬中的作用

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1、博士学位论文APR3蛋白的亚细胞学定位及其在细胞凋亡和自噬中的作用姓名：丁晓东学号：0107229160老师：顾学范教授学科专业：儿科学(内分泌、遗传代谢病)培养单位：上海交通大学医学院附属新华医院答辩日期：2014年4月30日万方数据申请上海交通大学博士学位论文APR3蛋白的亚细胞学定位及其在细胞凋亡和自噬中的作用研究生姓名：丁晓东研究生学号：0107229160指导教师：顾学范教授导师组成员：张惠文副研究员叶军主任医师韩连书主任医师邱文娟主任医师申请学位：医学科学学位博士学科专业：儿科学研究方向:内分泌、遗传代谢病培养单位：上海

2、交通大学医学院附属新华医院答辩日期：2014年04月30日本课题获得国家自然科学基金（项目编号：81071121）资助万方数据DissertationforPhDDegreeofShanghaiJiaoTongUniversityCELLUARLOCATIONOFAPOPTOSISRELATEDPROTEIN3ANDITSROLEINCELLAPOPTOSISANDAUTOPHAGYCandidate:DingXiaoDongStudentID:0107229160Supervisor:GuXueFanAssistantSuperv

3、isor:ZhangHuiWenYeJunHanLianShuQiuWenJuanAcademicDegreeAppliedfor:PhDSpeciality：PediatricsResearchInterests:Endocrinology,InheritedmetabolicdiseasesFaculty:XinHuaHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicineDateofDefence:2014.04.30Statementoffinancials

4、upport:ThisworkwassupportedbygrantsfromNationalNatureScienceFoundationofChina(81071121)万方数据上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2014年4月30日万方数

5、据上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：2014年4月30日日期：2014年4月30日万方数据上海交通大学博士学位论文APR3蛋白的亚细胞学定位及其在细

6、胞凋亡和自噬中的作用APR3蛋白的亚细胞学定位及其在细胞凋亡和自噬中的作用中文摘要目的：明确凋亡相关蛋白3（apoptosisrelatedprotein3，APR3）的亚细胞学定位，并探讨其在细胞凋亡和自噬中的作用。方法：采用生物信息学方法对APR3蛋白的信号肽、跨膜区、糖基化情况进行预测，并采用Real-timePCR和Westernblot检测APR3在小鼠各器官组织及多种细胞株中的表达。利用Percoll法蔗糖密度梯度离心技术获得小鼠肝脏组织溶酶体组份，并进行Westernblot分析，检测APR3蛋白与溶酶体膜标记蛋白LA

7、MP1在各亚细胞组份及溶酶体中的丰度；采用免疫荧光共聚焦方法探讨APR3与LAMP1或溶酶体示踪剂Lyso-TrackerRed共同定位情况，以及构建的APR3蛋白真核表达载体（pFUGW-APR3）表达的外源性APR3蛋白的亚细胞定位特征。APR3表达载体（pFUGW-APR3）和沉默载体（pLL3.7-APR3）转染NIH3T3细胞，采用CCK-8和xCELLigence活细胞计数法、碘化丙啶染色细胞流式细胞术等，检测APR3对细胞增殖活力、细胞周期、细胞溶酶体膜通透性、溶酶体腔pH、溶酶体腔多种酸性水解酶活性（如组织蛋白酶、酸

8、性磷酸酶、酸性脂酶和β-半乳糖苷酶等）等的影响；采用流式细胞术检测细胞凋亡情况，采用透射电镜技术检测细胞形态的变化；采用Westernblot法检测APR3对凋亡相关蛋白BAX、BAD、BCL-2和cleavedcaspase3表达的