ang--2tie--2在洛克沙胂促内皮细胞生长中的作用

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1、Ang一2／Tie．2在洛克沙胂促内皮细胞生长中的作用TheAng·-2／Tie—·2PathwayinGrowthPromotionofRoxarsoneonRatEndothelialCells研究生：徐迅专业：基础兽医学导师：张雨梅教授扬州大学兽医学院2014年6月中文摘要促血管生成素(Ang)是一种血管生成调节因子，已被证实能够参与调节生理和病理性血管生成过程。内皮细胞中的Ang／Tie信号通路在胚胎期血管形成、成熟，维持成熟血管稳定发挥重要作用。洛克沙胂(Rox)作为有机砷饲料添加剂被广泛运用，能够促进内皮细胞生长，但可能存在着潜在的致癌风险。本实验室已

2、从体内体外对洛克沙胂的促血管作用进行了相关研究。本文在洛克沙胂对大鼠内皮细胞的生长中，通过阻断Ang．2和Tie．2，利用MTT实验、免疫荧光分析、Elisa、Westernblot和荧光定量PCR方法，研究在Rox促内皮细胞生长中Ang／Tie系统发挥的作用。大鼠内皮细胞体外实验中，不同药物处理分组如下：3个Rox浓度组(0．10gM，1．00洲，10．00gM)；4个阻断剂组：50ng／mLAng一2阻断)；flJ(Anti—A)，50ng／mLTie-2阻断剂(Anti·T)，1．00gMRox+50ng／mLAng-2阻断剂(1+Anti-A)，1．00州

3、Rox+50ng／mLTie-2阻断剂(1+Anti．T)；PBS阴性对照，10ng／mLVEGF阳性对照。药物处理24h或者48h后，MTT法检测细胞活力，免疫荧光分析Ang一2和Tie．2的表达分布，Elisa法检测细胞上清中Ang．2水平，WesternBlot检测内皮细胞内Ang-2和Tie·2的表达，RT-PCR检测内皮细胞中Ang-2和Tie．2基因的转录水平。MTT法检测内皮细胞处理24h的细胞活力显示：O．10州～10．00州的Rox组OD值显著高于PBS组(P<0．05)，1．00rtM组OD值最高。l+Anti-A组、l+Anti．T组OD值显

4、著低于1．00rtM组(P<0．05)。内皮细胞处理48h的结果与24h相似。说明Ang．2及其受体Tie．2可能与Rox促内皮细胞生长有关。细胞爬片免疫荧光分析表明Ang．2主要分布在细胞质中，Tie．2主要表达在细胞膜上。Elisa实验检测内皮细胞培养液中的Ang一2含量。结果显示1．00gM和lO．00州Rox组Ang．2水平都显著高于PBS组(尸<0．05)，0．10gM组高于PBS组但差异不显著(尸>0．05)。Rox1．00}tM组的Ang一2水平最高。阻断Tie．2后，Ang．2水平显著升高(尸<0．05)。结果表明Rox可促进内皮细胞Ang．2的分

5、泌，1．00gM的Rox促分泌作用最强，Tie．2阻断与否与Ang．2分泌水平有关。WesternBlot实验对内皮细胞中的Ang一2和Tie．2蛋白分析表明，VEGF组、0．10gM、1．00gM、10．00¨MRox和Anti—T组与PBS组比较Ang．2的表达量显著升高(尸<0．05)，l+Anti—A组的Ang-2表达量显著低于1．00gMRox组(尸

6、组(尸<0．05)。洛克沙肿浓度为1．00州时，Ang．2和Tie．2的表达量最高。结果表明洛克沙胂能促进内皮细胞中的Ang．2和Tie．2的表达，且从蛋白水平表明Ang．2／Tie．2在洛克沙胂促内皮细胞生长中发挥作用。荧光定量PCR检测中，与PBS组比较，VEGF组和1．00rtMRox组Ang．2基因转录水平显著升高(尸

7、组、Anti．A组和Anti．T组都比PBS组显著升高(P<0．05)。Rox在1．00州时Tie．2基因转录水平最高。1+Anti．A组和1+Anti．T显著低于1．000M。Rox能显著提高Ang一2和Tie．2的mRNA转录水平，从mRNA水平说明Ang．2／Tie-2在洛克沙胂促内皮细胞生长中发挥作用。综上所述，洛克沙胂在0．10pM～10．00gM范围能促进内皮细胞增殖，提高Ang．2和Tie-2的表达，且Ang一2／Tie．2信号在Rox促内皮细胞生长中发挥重要作用。关键词：洛克沙胂；内皮细胞；Ang．2；Tie．2．丝璺!坠竺!一坐_一—_——l——

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