14-3-3蛋白调控cav2.2通道膜转运机制

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1、万方数据上海交通大学医学院博士学位论文14．3．3蛋白调控Cav2．2通道膜转运机制作者姓名：刘丰指导老师：李勇教授专业学科：神经生物学答辩日期：2014年1O月29曰研究方向：膜受体转运与疾病的关系资助基金：国家自然科学基金(81171230和31371064)国家重大研究计划(2010CB912001和2014CB910303)国家自然科学基金重大研究计划(91132303)申请学位：博士培养单位：上海交通大学医学院万方数据卜海交通大学医学院博士学位论文14—3—3百PromotesSurfaceExpre

2、ssionofCav2．2(0c1B)Ca2+ChannelsAuthor：Mentor：FengLiuYongLiMajor：NeurobiologyDerensedate：2014．10．29Researchfields：ReceptorTraffickingandDiseaseGrantsupport：NationalNaturalScienceFoundationofChina(81171230and31371064)NationalBasicResearchProgramofChina(2010CB9

3、12001and2014CB910303)MajorResearchPlanoftheNationalNaturalScienceFoundationofChina(9132303)DegreeApplied：Ph．D．Organization：ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine万方数据卜海交通大学医学院博士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文

4、不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：乒1牟日期：沙f年年f1月r日万方数据上海交通大学医学院博士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描

5、等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于／不保密囱。(请在以上方框内打“4”)学位论文作者签名：多、鼻指导教师一日期：功fq--年f1月f日日勘垆∥月j171万方数据上海交通大学医学院博士学位论文14．3．3蛋白调控Cav2．2通道膜转运机制中文摘要研究目的：电压门控钙离子通道(voltage—gatedcalciumchannel，Cav)对于维持可兴奋细胞钙稳态及其正常结构和生理功能具有重要作用。Cav膜表达的调控正日益受到关注，其孔道结构成分Ⅸl亚单位的膜转运及在缺

6、乏Cav辅助亚单位的条件下其膜转运的变化和机制，目前仍不清楚。本研究探讨了14．3．3蛋白在Cav2．2通道膜转运过程中的作用及其机制。研究内容：14—3．3蛋白是否调控及如何调控Cav2．2通道膜转运，探索14．3．3蛋白对Cav2．2通道膜转运的影响及其转运途径和相关的可能机制。研究方法：逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测tsA．201细胞和小鼠脑中各类内源性Cav通道辅助亚单位mRNA的表达情况；免疫印迹、免疫共沉淀方法研究14—3—3蛋白与Cav2．2钙通道孔道结构成分ctlB亚单位C末端片段之间

7、的相互作用；细胞免疫荧光染色及激光共聚焦技术，观察Cav2．2仪lB以及Cav2．2alBC末端片段的质膜表达情况，探索14．3—3蛋白对Cav2．2etlB膜转运的影响及可能作用机制；单细胞膜片钳电生理技术检测tsA．201细胞上转染的Cav2．2alB通道电流密度及原代培养的海马神经元上的Cav2．2道电流密度，从功能角度进一步观察14—3—3蛋白对Cav2．2a1B膜表达的影响以及CavB亚单位与14—3—3蛋白协同调控Cavctl膜表达的可能性。结果：在缺乏Car辅助亚单位条件下，14—3—3T增强Ca

8、v2．2GtlB膜表达水平，而表达14．3．3蛋白抑制肽(pSCMl38)阻断14．3．3蛋白与Cav2．2otlB之间的相互作用，则会抑制14．3．3蛋白增强Cav2．2ctlB膜表达水平效应；Cav2．2a1BC末端存在一段内质网滞留信号，14—3—3蛋白能够影响包含此内质网滞留信号序列的Cav2．2cdBC末端片段(CTl，aal706．1940)而改变其膜表达水平，却不影响无此