gainac-t14和igfbp-3对脑胶质瘤细胞u87mg的作用及其分子调控机制研究

《gainac-t14和igfbp-3对脑胶质瘤细胞u87mg的作用及其分子调控机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文GaINAc--T14和IGFBP--3对脑胶质瘤细胞U87MG的作用及其分子调控机制研究姓名：孔海波申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：扈玉华；徐东刚201203中文摘要GalNAc．T14和IGFBP．3对脑胶质瘤细胞U87MG的作用及其分子调控机制研究摘要第一部分IGFBP．3对胶质瘤细胞株U87MG增殖的作用及调控ERK信号通路的研究目的：探讨IGFBP．3对胶质瘤细胞增殖的影响及可能的分子调控机制。方法：选用低表达IGFBP．3的胶质瘤细胞株U87MG，分成三组即未处理组(Contr01)、转染pCMV-myc质粒组(NC)、转染pCMV-IGFB

2、P．3质粒组(I)，瞬时转染U87MG细胞株，并于细胞培养箱内孵育48h后，提取细胞总RNA和细胞总蛋白，采用RT-qPCR技术和Westernblot方法检测胞内ERKl／2的mRNA和蛋白表达水平、ERKl／2的磷酸化水平和抗凋亡蛋白Bcl．XL的表达情况。同时应用MTT法检测经IGFBP一3胞外刺激U87MG细胞株后细胞增殖情况及AnnexinV．FITC／PI双染色法于流式细胞仪上检测转染pCMV．IGFBP．3质粒后细胞的凋亡情况。结果：在U87MG细胞中过表达IGFBP．3后，胞内ERKl／2的mRNA和蛋白水平无明显变化，但磷酸化明显增强，下游抗凋亡Bcl．XL的表达上调

3、。MTT显示当IGFBP．3的浓度为50ng／ml和500ng／ml时，细胞增殖显著增加(分别为庐O．os和p

4、的作用及可能的分子调控机制。方法：本研究成功构建TpcDNA3．1．GalNAc．T14的真核表达载体。将中文摘要U87MG细胞分成三组即未处理组(Contr01)、转染pcDNA3．1(+)质粒组(NC)、转染pcDNA3．1．GalNAc．T14质粒组(T14)，瞬时转染U87MG细胞株，并于细胞培养箱内孵育48h后，提取细胞总RNA和细胞总蛋白，采用RT-qPCR技术和Westernblot方法检测胞内ERKl／2的mRNA和蛋白表达水平及ERKl／2的磷酸化水平；抗凋亡蛋白Bcl．XL的表达情况。同时应用AnnexinV．FITC／PI双染色法经流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结

5、果：在U87MG细胞中过表达GalNAc．T14后，胞内ERKI／2的mRNA和蛋白水平明显下降，但其磷酸化无明显变化；Bcl．XL的表达明显下调。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示：(Contr01)组和(NC)组的凋亡率分别为3．48％和4．42％，而(T14)组的凋亡率达至lJ40．83％，细胞凋亡明显增加。结论：GalNAc—T14可以抑制ERKl／2的表达，下调下游靶基因Bcl．XL的表达，从而促进胶质瘤细胞的凋亡。进一步认识了GalNAc．T14在肿瘤细胞中发挥生物学功能的分子机制。第三部分GalNAc．T14调节IGFBP．3的生物学功能的研究目的：探讨U87细胞中GalNA

6、c．T14对IGFBP．3的生物学功能的影响。方法：将U87MG细胞分成四组即pCMV／pcDNA组(Contr01)、转染pCMV．IGFBP．3／pcDNA3．1(+)组(BP．3／pcDNA)、转染pcDNA3．1．GalNAc．T14／pCMV-myc组(T14／pCMV)、转染pCMV-IGFBP-3／pcDNA3．1．GalNAc．T14质粒组(BP．3／T14)，瞬时转染U87MG细胞，于培养箱内分别培养0、12h、24h、48h、72h、96h。采用MTT法检测各组细胞随孵育时间的增殖变化。采用AnnexinV．FITC／PI双染色法经流式细胞仪检测共转染pCMV-IG

7、FBP．3／pcDNA3．1．GalNAc．T14质粒后细胞的凋亡情况。结果：与pCMV／pcDNA组(Contr01)，IGFBP．3具有明显的促增殖作用；GalNAc．T14具有明显的促凋亡作用；而共转染二者后细胞活性较IGFPB．3单独作用时明显降低。凋亡实验结果显示共表达IGFBP．3和GalNAc．T14后细胞凋亡无明显增加。结论：在胶质瘤细胞中，GalNAc．T14可以抑制IGFBP．3的促增殖作用，表明其参与调节IGFBP．3的生