鸡包涵体肝炎病毒部分血清型dna探针的制备及其流行病学调查

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1、崔杨：鸩包涵体肝炎}肉毒DNA探针的制备及』C流行病学调金鸡包涵体肝炎病毒部分血清型DNA探针的制备及其流行病学调查摘要鸡包涵体肝炎(chickeninclusionbodyhepatitis，IBH)是由禽腺病毒引起的一种世界范围内的急性传染病。主要发生于3—7周龄的肉鸡，是由多种不同血清型的禽腺病毒引起的，可与其它的细菌病毒继发或并发感染。禽腺病毒属于禽腺病毒科禽腺病毒属的成员，目前为止，人们发现有12个血清型的禽腺病毒与鸡包涵体肝炎相关。其中与自然爆发的包涵体肝炎相关的血清型至少有10个。2型、3型、4型、5型、6型、7型和8型为引起鸡IBH

2、的主要血清型。自然爆发的鸡包涵体肝炎的特点为：病鸡突然死亡，感染后3—4天为高峰期，5天后恢复正常，但有时会持续2—3周。主要表现为：严重贫血、肝脏肿大出血和坏死灶、黄疸、肝细胞核内可见包涵体。我国于1976年首先在台湾省发现该病，此后在江苏省、湖南省、吉林省、辽宁省、河南省和内蒙古都相继发生，呈R益蔓延趋势。鸡包涵体肝炎给世界范围内的养禽业带来了重大的损失。斑点杂交技术简单的操作以及较低的成本是检测此病理想的选择。鸡禽腺病毒的最佳分离培养物是鸡胚，经由卵黄囊接种后，胚胎可于2～7天内死亡，在肝细胞中常可见嗜碱性核内包涵体，其细胞核可较正常大2～3

3、倍。将各血清型标准毒株通过鸡胚卵黄囊接种对其进行增殖培养，从NCBIGenBank数据库中禽腺病毒血清型3、5、6、7、9、10、11六邻体蛋白基因的标准序列里，找出保守性序列和血清型之间同源性低的序列，用此段序列来设计7对引物。分别提取增殖的病毒的DNA，并进行PCR扩增，得到相应大小的目的产物，目的条带经切胶回收定量后，用地高辛标记即为包涵体肝炎病毒核酸探针，将探针进行灵敏度检测后，可以得出探针的最小检出量均达到5pg。通过特异性检测可知各血清型探针之间不存在交叉反应。建立斑点杂交的检测方法，并用于检测山东、江苏、河南部分地区采集的病料，上述各

4、地区均检出阳性病鸡。通过实验，并结合师兄师姐前面所监测的其他5种血清型，表明了鸡包涵体肝炎病的普遍流行，其中以血清2、3、4、5、6、7、8型腺病毒的流行较为普遍，同之前的流行病学调查结果是一致的。本实验建立的斑点杂交诊断方法有较高的灵敏度和良好的特异性，通过建立的斑点杂交诊断方法可以对阳性病料进行检测，可用于生产中实验室的诊断以及检测。关键词：包涵体肝炎，SPF鸡胚，六邻体蛋白，斑点杂交，地高辛扬州人学顺lj学位论文ThepreparationoftheDNAprobeofchickeninclusionbodyhepatitisvirusand

5、itsepidemiologicalinvestigationAbstract’Inclusionbodyhepatitis(IBH)associatedwithfowladenovirus(FAdV)infectionhasaworldwidedistribution．Inclusionbodyhepatitis(IBH)isanacutedisease，mainlyoccumnginyoungchickens(3-7weeksofage)andcausedbyseveralserotypesoffowladeno-virus．Theepidem

6、iologicalstudiesonthefieldoutbreaksofIBHindicatedthatmostofthefieldoutbreakswerefoundinassociationwithotherdiseaseconditionsthatresultedinhighmortality．FAdVsthatinfectmostlychickensareclassifiedinthegenusAviadenovirusunderthefamilyAdenoviridae，andarefurtherclassifiedintofivesp

7、eciesand12serotypes．Thereare10serotypesrelatedtoinclusionbodyhepatitisofnaturaloutbreaksatleast．SerotypescitedIBHaremainlytype2，3，4，5，6，7andtype8．NaturaloutbreaksofIBHarecharacterizedbyasuddenonsetofmortality,peakingafter3-4dayspostinfection(dpi)，whichusuallyreturnstonormalat5

8、dpi，butoccasionallycontinuesfor2-3weeks．Morbidityislowandsick