硬骨鱼类msls基因的结构和功能分析

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1、囊萎夫学硕士学位论文硬骨鱼类MSLs基因的结构和功能分析StructuralandFunctionalStudyofMaleSpecificLethalsGenesinTeleostFish学位授予单位：塞差太堂论文答辩日期：圣Q12生鱼旦垒旦学术诚信声明呲Y啪2㈣63哪罂帆7她3㈣71兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此论文产生的权利和责任。声明人(签名)：孙歌伙时间：lOt2．占．f3保护知识产权声明本人完全了解集美大学有关保

2、留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。作者(签名)：导师(签名)：时间：20t2．占．孙歇伙互艺薛遗晔似懒伙)J3硬骨鱼类MSLs基因的结构和功能分析摘要硬骨鱼类在物种进化过程中具有重要的地位，是生物学研究中的重要模式生物。大黄鱼(Larimichthyscrocea)和斑马鱼(Dan而rerio)都属典型的硬骨鱼。大黄鱼因其重要的经济价值己逐渐成为研究的热点，斑马鱼因其代时短，易繁殖和管理的优点系重

3、要模式生物，被广泛应用于众多的生物研究领域。雄性特异性致死基因MSLs(Male-specificlethals)在一些无脊椎动物如果蝇(Drosophilamelanogaster)体内发挥着平衡性别差异的重要作用，但其在硬骨鱼类中的作用未见报道，通过对硬骨鱼类MSLs基因的结构和功能分析将有助于揭示MSLs基因在结构和功能上的进化历程。本实验通过对实验室构建的大黄鱼性腺EST数据库进行生物信息学分析，筛选获得msll和msl3的部分基因片段，同时根据NCBI数据库中已有的其他物种msl2基因序列设计简并引物，利用RT-PCR的方法扩增获得msl2的基因片段。进而利用SM

4、ART-RACE技术克隆获得大黄鱼MSLs基因Lc—msll、Lc—msl2和Lc—msl3的全长cDNA序列，对其在大黄鱼雌雄各组织器官及胚胎发育各时期的表达情况进行了实时荧光定量PCR分析。扩增获得大黄鱼Lc—msll的基因组序列，并利用生物信息学软件对硬骨鱼类msll基因进行基因组结构的比较，对硬骨鱼类的msll、msl2和msl3进行基因同线性分析。根据NCBI数据库中斑马鱼Dr．msll基因mRNA序列，分析其在斑马鱼胚胎发育过程中的表达、定位和功能。结果如下：(1)Lc．msll的cDNA序列全长1768bp，包括140bp的5’非编码区域、251bp的3’非编

5、码区(含19bp的polyA部分)和1377bp的开放阅读框，可编码458个氨基酸，预测其分子量为52．561kDa，等电点为7．57。实时荧光定量PCR结果显示，Lc—msll基因在雌雄各组织和胚胎发育不同时期均有表达，其中在雄性脑中的表达量显著高于其他各组织(P

6、．msl2的cDNA序列全长2187bp，包括498bp的5’非编码区域、141bp的3’非编码区(含17bD的polyA部分)和1548pb的开发阅读框，可编码515个氨基酸，预测分子量为55．772kDa，等电点为9．1l。Lc．MSL2的锌指结构空间预测结果更近似果蝇Dm—MSL2。实时荧光定量PCR显示，Lc—msl2基因在雌雄大黄鱼各组织器官的表达情况类似Lc—msll，各组织中均有表达，且同样在雄性脑中的表达量显著高于其他各组织(P<0．05)，Lc—msl2mRNA的量在胚胎多细胞期较低，随后在囊胚期有显著升高(P<0．05)，之后各时期Lc．msl2mRNA

7、的量无显著变化(P>O．05)。msl2基因同线性分析结果显示，大多数真硬骨动物(Euteleostomi)(包括硬骨鱼类和哺乳动物等在内)中都存在一个由ENSDARG00000056262、stagl、pccb和msl2(2of2)4个基因构成的保守基因同线群。(3)Lc—msl3的cDNA序列全长3386bp，包括117bp的5’非编码区域、1631bp的3’非编码区(含18bp的polyA部分)和1638pb的开发阅读框，该开放阅读框可编码545个氨基酸，预测分子量为61．997kDa，等电点为9．14。实时