甘蓝型油菜核不育系9012ab的遗传模式修正与bnrf位点的物理定位

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1、华中农业大学博士学位论文甘蓝型油菜核不育系9012AB的遗传模式修正与BnRf位点的物理定位姓名：董发明申请学位级别：博士专业：作物遗传育种指导教师：杨光圣201205甘蓝型油菜核不育系9012AB的遗传模式修正与占h肜位点的物理定位摘要利用杂种优势是提高油菜产量、增强抗耐性、缓解产量与品质矛盾的重要途径。隐性细胞核雄性不育具有不育性稳定彻底，恢复源广，无负胞质效应等优点，是一种具有较大应用潜力的授粉控制系统。然而，大部分隐性核不育材料无法完全保持，制种时必须拔除母本行中约50％的可育株。因此，应用隐性核不育系在大面积制种时成本高且风险较大。上世纪90年代，

2、9012AB类型的隐性核不育通过引入临保系产生100％不育群体，为隐性核不育系统的利用开辟了一条新的途径。目前，该系统(或相似系统)已成为我国乃至世界油菜杂种优势利用的重要途径之一。本研究在系统的遗传分析和图谱定位的基础上，修正了9012AB的育性遗传模型。在此基础上，通过比较作图实现TBnRf位点的精细定位，并最终将其定位到一个BAC克隆13．8kb的物理区间内，主要结果如下：1．9012AB类型核不育育性遗传模式的修正。通过对9012AB及其临保系T45与来源不同的几个自交系和常规品种的遗传分析，发现之前被广泛接受的三对基因(Bnms3，Bnms4，Bn

3、rf或Bnesp)控制育性的遗传模式不能合理解释9012A与DH206A杂交后代的育性分离比率。基于这一事实，对9012AB的育性遗传模式进行了修正，即雄性不育只受BnMs3和B，2尽厂两个位点控制，显性BnMs3为野生型可育基因，隐性Bnms3为突变不育基因；而原来假定的BnMs4位点实质上是B刀足胜点的一种复等位基因型BnRf(恢复型)，该位点的另外两种基因型分别为丑挖矿(不育型)和B,,Rf(可育型)，三者的显隐性关系为砌影口>砌彤哆勘胪。按照这一遗传模式，9012AB可育株基因型为B玎尬3聊s3矿矽，不育株基因型为B行珑s3mJ3矽旷；临保系基因型为

4、Bnms3ms3RfRf，恢复系基因型为BnMs3Ms3一一或Bn一2《尸矿。2．曰咒冠，复等位遗传模式的分子标记验证。在来源于(9012A×DH206A)F2中可育株与9012A回交得到的育性分离比为1：1的FzBCI株系中，鉴定出基因型为Bnms3ms3RfaRfb的可育株。在该类型可育株继续与9012A回交得到育性分离比为1：1的群体RG206AB(RG206A，Bnms3ms3RfbRfb；RG206B，Bnms3ms3彤飞户)中，筛选获得了与BnRf等位基因型连锁的13个AFLP标记和5个SSR标记。标记整合发现，5个SSR标记都被定位于A7连锁群

5、且同时与B，2彤曲基因型连锁，而3个由AFLP转化而成的SCAR标记亦-与BnRfb存在连锁关系。在此基础上，利用BnRfl精细定位的标记实现华中农业大学2012届博士研究生学位论文YBnRf的精细定位，并将砌R尸和砌矽共定位到标记AT3G24240与AT3G23900之间，对应拟南芥共线性区域约50kb。该结果从分子标记水平上初步证实了R脏点复等位遗传模式的可靠性，并为该位点物理图谱的整合奠定基础。3．含B厅彤位点区域的物理图谱构建。利用B锨广共分离的分子标J,己AT3G23870从9012A中扩增的特异序列为探针筛选甘蓝型油菜BAC克隆文库，获得16个阳

6、性克隆。位点两侧最近的共显性标记AT3G23900及AT3G24240对候选克隆的PCR分析表明，BAC克隆JBIlB089D05和JBIlBl34D11最可能包含目标位点。而源于JBnB089D05两侧末端序列开发的标记BESl8和BESl9进一步被定位到局迟俩侧，证实该克隆包含目标基因。从该BAC克隆上获得了B门聊辱侧最近标记AT3G23900与AT3G23910．1之间13．8kb的序列，预测表明其包含3个完整的ORF及2个ORF的部分片段。关键词：甘蓝型油菜；隐性核不育；复等位遗传；Bn肼精细定位：物理图谱；分子标记辅助选择甘蓝型油菜核不育系9012

7、AB的遗传模式修正与历I彤’位点的物理定位ABSTRACTTheutilizationofheterosisisanimportantapproachtoimproveyield，resistanceforbioticstressandabioticstress，andalleviateyieldandqualitycontradictionsinrapeseed．Asaneffectivepollination-controlsystem，recessivegeniemalesterile(RGMS)linesarealwaysregardedtoposs

8、essseveraladvantages，sucha