牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生内皮素-1一氧化氮的研究

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1、遵义医学院硕士学位论文牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生内皮素--1/一氧化氮的研究姓名：雷邓申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：葛颂201205遵义医学院硕士学位论文Pg—LPS诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生ET-1／NO的研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生内皮素1／m氧化氮的研究硕士研究生：雷邓导师：葛颂教授(贵州省遵义医学院附属ISl腔医院ISl腔内科563003)中文摘要目的：分析两种不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(P．gingivalis)脂多糖(1ipopolysacchari

2、des，LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothdiMcells，HUVECs)炎症反应相关信号转导通路及产生内皮素．1(endothelin．1，ET-1)和一氧化氮(nitricoxide，NO)的影响。方法：1．厌氧培养IlfimA型(WCSPll5)、IVfimA型(W83)P．gingivalis，热酚-水法提取P．gingivalis．LPS，SDS．PAGE、鲎试验对提取的LPS予以鉴定。2．体外培养HUVECs(CRL．2480)，待单层融合后，分别加入不同终浓度的II、IVfimA型Pgin

3、givalis．LPS(O．59∥ml、59∥ml、lO肚#m1)共同培养2h、6h、24h，提取HUVECs总RNA，RealTime．PCR检测CD14、TLR2(Toll．1ikereceptor2)、TLR4(Toll．1ikereceptor4)和MyD88(myeloiddifferentiationfactor88)、ECE一1的mRNA表达水平，流式细胞术(FCM)检测HUVECs膜表面CDl4、跨膜受体TLR2和TLR4膜蛋白表达量，ELISA法检测上清中ET-1的水平，硝酸还原酶法测定上清NO的水平。结果：1．II、WfimA型P

4、．gingivalis-LPS诱导HUVECsCD14mRNA表达量增加，IIfimA型P．gingivalis—LPS诱导HUVECsCDl4mRNA表达水平强于WfimA型；2h时，IVfimA型和24h时，IIfimA型P．．gingivalis．LPS诱导CDl4mRNA相对表达量增加呈浓度依赖性。2h时，II、IVfimA型Pgingivalis—LPS诱导CDl4膜蛋白水平与阴性对照组比较差异无统计学意义；6h时，IlfimA型Pgingivalis-LPS59∥ml、109ffml及IVfimA型5“ffml，24h时，IlfimA型l

5、O斗g／ml、WfimA型Pgingivalis—LPS59∥ml、101xg／ml组诱导CDl4膜蛋白水平高于阴性对照组(P

6、尸g-LPS诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生ET-1／NO的研究2．6h、24h时，HfimA型及三个时间段IVfimA型的高浓度组(51．tg／ml、Ortg／rnl)P．gingivalis-LPS诱导HUVECs表达TLR2mRNA水平高于阴性对照组(P

7、WfimA型Pgingivalis-LPS诱导TLR2膜蛋白水平与阴性对照组比较差异无统计学意义；6h、24h时，5}tg／ml、10I．tg／mlIIfimA型及6h时，5,g／m1、24h时，5I，tg／ml、10}tg／mlWfimA型P．．gingivalis—LPS诱导的TLR2膜蛋白水平升高(P<0．05)，与基因水平相符；IIfimA型Pgingivalis—LPS诱导TLR2膜蛋白水平具浓度依赖性。3．IIfimA型及6h、24h时，WfimA型P．gingivalis—LPS刺激HUVECsTLR4mRNA的表达量高于阴性对照组(P

8、0．05)；24h时，IIf