ifima型牙龈卟啉单胞菌诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生内皮素-1一氧化氮的研究

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1、遵义医学院硕士学位论文IfimA型牙龈卟啉单胞菌诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生内皮素--1/一氧化氮的研究姓名：任庭妤申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：葛颂201205遵义医学院硕士学位论文IfimA型Pg诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生ET_1／NO的研究IfimA型牙龈卟啉单胞菌诱导内皮细胞炎症反应的信号通路和产生内皮素．1／--氧化氮的研究硕士研究生：任庭妤导师：葛颂教授(贵州省遵义医学院附属口腔医院口腔内科563003)中文摘要目的：分析Ifi,,钆4型尸gingivalis脂多糖(1ipopolysaccharide，LP

2、S)和菌毛蛋白FimA诱导人脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)炎症反应的相关信号转导通路以及对HUVECs产生内皮素．1／一氧化氮的影响。方法：1、体外培养HUVECs(CRL．2480)，待HUVECs单层融合后，分别与不同终浓度的IfimA型Pgingivalis-LPS(O．5p咖1、5斗咖1、1099／m)和rFimA(0．5肛ffml、59∥ml、109Wml)共同培养2h、6h、24h，提取HUVECs总RNA，RealTime-PCR检测CDl4、TLR2(Toll-li

3、kereceptor2)、TLR4(Toll-likereceptor4)和MyD88(myeloiddifferentiationfactor88了的mRNA表达水平，流式细胞术(FCM)检测HUVECs膜表面CDl4、跨膜受体TLR2和TLR4蛋白表达量：2、体外培养HU、，ECs(CIU．2480)，待HUVECs单层融合后，分别与不同终浓度的IfimA型Pgfingtvalis-LPS(0．5I，tg／ml、599／ml、109tg／m1)共同9呼育2h、6h、24h，ELISA法测定ET-1的水平，硝酸还原酶法测定NO的水平。结果：1、Ifim

4、A型Pgingivalis—LPS在6h、24h时诱导HUVECsCDl4mRNA表达量增加，6h时CDl4mRNA表达量增加呈浓度依赖性；IfimA型Pgingivalis—LPS在6h、24h时诱导HUVECs分泌CDl4蛋白水平高于阴性对照组(P<0105)，与基因水平相符，且CDl4蛋白水平的增加呈浓度依赖性，2h时IfimA型Pgingivalis—LPS诱导HUVECs分泌CDl4蛋白水平与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>O．05)。I疗，刎型Pgingivalis—LPS在2h、24h和6h时5ug／ml、10ug／ml诱导HUVECs

5、TLR2mRNA表达量增加，5ug／ml浓度下表达量增加呈时间依赖性；IfimA型Pgingivalis—LPS在6h、24h时诱导HUVECs分泌TLR2蛋白水平高于阴性对照组(P

6、应的信号通路和产生E●1／NO的研究赖性；IfimA型Pgingivalis—LPS在6h、24h时诱导HUVECs分泌TLR4蛋白水平高于阴性对照组(P0．05)。IfimA型Pgingivalis—LPS诱导HUVECsMyD88mRNA表达量增加，在2h和6h时MyD88mRNA表达量增加呈浓度依赖性，5ug／ml组MyDS8mRNA相对表达量高于0．5ug／ml。2、IfimA型Pgingivalis—rFimA

7、诱导HUVECsCDl4mRNA表达量增加，6h和24h时CDl4mRNA表达量增加呈浓度依赖性，10ug／ml浓度下诱导HUVECsCDl4mRNA表达量增加呈时间依赖性；6h时IfimA型Pgingivalis-rFimA诱导HUVECs分泌CDl4蛋白水平高于阴性对照组(P

8、IfimA型Pgingivalis—rFimA在2h时诱导HUVECs分泌TLR