半导体激光预照射治疗脉络膜新生血管的研究

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1、题目：半导体激光预照射治疗脉络膜新生血管的研究姓名：杜珊珊专业：眼科学研究方向：激光在眼科的应用申请学位级别：博士指导教师：廉井财培养单位：上海交通大学附属瑞金医院资助基金项目：国家自然科学基金(No．60978030)2012．4．27Title：Diodelaserpre—irradiatiOnforchoroidalneovascularizatiOnName：DUShanshanProfession：OphthalmologyResearchDirection：LaserapplicationinOphthal

2、mologyAcademicDegree：Ph．D．Advisor：．LianJingcaiTrainingOrganization：RuijinHospitalAssistanceFundProject：NationalNaturalScienceFoundationofChina(No．60978030)Date：2012．4．27上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写

3、过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：q≥张对日期：Jo,)年年月f9日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于

4、，不保密酬(请在以上方框内打“4’’)学位论文作者签名竭力巾灯日期：如I≥年年月刁日指导教师签名：毫p妒日期：孑夕旃4月猡半导体激光预照射治疗脉络膜新生血管的研究摘要目的：脉络膜新生血管(choroidalneovascularization，CNV)可发生于多种眼底疾病，最终导致视功能严重且不可逆性丧失，但目前尚缺乏安全、有效的治疗方法。如何在封闭CNV的同时尽可能减少对周围正常组织的损伤是半导体激光治疗CNV的关键。热休克蛋白70(heatshogkprotein70，Hsp70)是一种分子伴侣，在热刺激或其他应激

5、条件下合成增多，对生物组织具有抗凋亡和抗坏死的双重保护作用。本实验首先检测体外培养的猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(砌[iI／6A)进行810nm半导体激光照射后Hsp70的表达，之后观察高能量激光照射联合阈值下激光预照射对细胞的影响，最后通过视网膜下腔注射Matrigel建立非激光诱导的CNV动物模型，为进一步在活体内研究半导体激光阈值下预照射治疗CNV打下基础。方法：细胞实验部分，首先应用不同功率的810nm半导体激光对RF／6A细胞进行照射，光斑直径10mm，曝光时间60秒，激光照射后在倒置光学显微镜下观察细胞形态，

6、AnnexinV-FITC和碘化丙啶(propidiumiodide，PI)双染色流式法检测细胞活力及确定造成细胞损伤的激光能量阈值，并分别在激光照射后6，12，18，24和48h采用westernblot法检测细胞Hsp70的表达，应用免疫荧光法检测Hsp70在细胞中的分布；之后将砌[iI／6A细胞分组，在进行高能量激光照射前给予或不给予阈值下激光预照射，照射后在光学显微镜下观察细胞形态，AnnexinV-FITC和PI双染色流式法检测细胞活力，TUNEL法检测细胞凋亡，westernblot法检测细胞Hsp70的表

7、达及免疫荧光法检测细胞中活化caspase3的表达。动物实验部分，对健康成年棕色挪威(BrownNorway，BN)大鼠视网膜下腔注射Matrigel或磷酸盐缓冲盐溶液(phosphatebufferedsaline，PBS)2肛l，分别在注射后3天和1、2、3、4、5、6周进行眼底照相、眼底荧光血管造影(fundusfluoresceinangiography，FFA)、吲哚菁绿血管造影(indocyaninegreenangiography，ICGA)和组织病理学检查。结果：810am激光造成RF／6A细胞损伤的阈

8、值功率为1100mW(能量密度84．08J／cm2)，应用低于此能量的激光照射后，细胞中Hsp70表达明显升高，以600～1000mW(能量密度45．86—76．43J／cm2)最为显著。Hsp70在照射后12h达到高峰并持续至18h，24h后逐渐降低，约48h恢复到正常水平，免疫荧光染色显示激光照射后Hsp70在胞浆和胞核中均明