他克莫司联合罗格列酮对tnf-α诱导的hacat细胞体外增殖、分化的影响及相关机制的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文他克莫司联合罗格列酮对TNF--α诱导的HaCaT细胞体外增殖、分化的影响及相关机制的研究姓名：文晓婷申请学位级别：硕士专业：皮肤病与性病学指导教师：魏志平2012-05徐州医学院硕士学位论文他克莫司联合罗格列酮对TNF-Q诱导的HaCaT细胞体外增殖、分化的影响及相关机制的研究中文摘要目的研究他克莫司、罗格列酮单独以及联合应用对TNF—O诱导的HaCaT细胞体外增殖、凋亡、分化的影响，观察他克莫司与罗格列酮联合应用对TNF．Q诱导的HaCaT细胞体外增殖的抑制作用与诱导分化作用是否具有协同效应，并探讨其相关机制，

2、为他克莫司联合罗格列酮治疗特殊人群银屑病(如糖尿病合并银屑病)提供实验和理论依据。方法以TNF．Q诱导的永生化人角质形成细胞株HaCaT细胞为银屑病角质形成细胞炎性模型。采用CCK．8法检测他克莫司与罗格列酮单独以及联合应用对TNF．Q诱导的HaCaT细胞体外增殖的抑制作用；半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)测定他克莫司与罗格列酮单独以及联合应用对TNF—Q诱导的HaCaT细胞分化标志物外皮蛋白与角蛋白6mRNA表达的影响；流式细胞术检测他克莫司与罗格列酮单独以及联合应用对HaCaT细胞凋亡和细胞周期变化的影响；Westernb

3、lot方法测定他克莫司与罗格列酮单独以及联合应用对TNF—Q诱导的HaCaT细胞CyclinDl和P21表达的影响。结果1．CCK．8法检测结果表明TNF—Q可有效诱导HaCaT细胞体外增殖，他克莫司(10pmol／L)，罗格列酮(10、20、40、80pmol／L)单独以及联合应用对TNF．Q诱导的HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用，以上各浓度组单独应用对TNF．Q诱导的HaCaT细胞体外增殖抑制率分别为：(21．74+5．36)％、(5．04士7．12)％、(12．56+6．93)％、(21．41+5．95)％、(39．1

4、74-8．03)％，他克莫司(109mol／L)分别与罗格列酮(10、20、40、80pmol／L)联合应用对TNF—Q诱导的HaCaT细胞体外增殖抑制率分别为：(27．60+6．68)％、(38．35土7。24)％、(48．60．{-8．40)％、(65．21士4．53)％。结果表明他克莫司与罗格列酮联合应用对HaCaY徐爿’l医学j完硕士学位论丈细胞的体外增殖抑制作用更强，与他克莫司、罗格列酮单独应用组比较差异有统计学意义(P

5、)单独应用48h后可不同程度的抑制TNF—Q诱导的HaCaT细胞角蛋白6的表达、促进外皮蛋白的表达，角蛋白6与p．actin的荧光强度比值分别为：0．384+0．010、0．626士0．012、O．533土0．012，外皮蛋白与p—actin的荧光强度比值分别为：0．922+0．026、0．41210．012、0．56810．021，与TNF．Q诱导组比较差异有统计学意义(P<0．05)。他克莫司(109mol／L)与罗格列酮(10、409mol／L)联合应用48h后对HaCaT细胞角蛋白6的抑制及外皮蛋白的促进作用显著增强，角蛋白6与

6、B．actin的荧光强度比值分别为：0．215+0．012、0．120士0．021，外皮蛋白与B—actin的荧光强度比值分别为：1．087士0．011、1．253士0．016，与他克莫司、罗格列酮单独应用组相比较差异有统计学意义(P<0．05)。3．流式细胞术检测结果显示他克莫司(109mol／L)和罗格列酮(10、409mol／L)单独以及联合应用48h后，HaCaT细胞凋亡率分别为：(1．3610．13)％、(1．47+0．09)％、(1．74士0．13)％、(1．97士0．10)％、(2．65士0．22)％，与TNF．a诱导组相

7、比差异有统计学意义(P<0．05)，他克莫司与罗格列酮联合应用组较相应单独用药组诱导作用更强(P

8、阻滞HaCaT细胞的周期进程，尤以联合应用组作用更强。5．Westernblot检测结果表明他克莫司(10Ltmol／L)和罗格列酮(10、401amol／L)单独作用于TNF—Q诱导的HaCaT细胞48h