β-arrestin1调控慢性髓细胞白血病增殖的表观遗传学研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文β--Arrestin1调控慢性髓细胞白血病增殖的表观遗传学研究姓名：李康申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：邹琳201205p-arrestinl调控慢性髓细胞白血病增殖的表观遗传学研究目的在前期的研究中，我们发现慢性髓细胞白血病(CML)中13-arrestinl表达增强，且敲除CMLK562细胞中的13-arrestinl可抑制CML细胞增殖。本研究进一步从全基因组水平探讨13-arrestinl调控CML增殖过程中的表观遗传机制，为寻找CML的分子靶点及机制提供新的理论依据。方法1．在CMLK562细胞和患者骨髓单个核细胞中，

2、分别感染对照质粒(Fugw)和敲除13-arrestinl慢病毒体系(silBl)，采用Q—PCR、MSP和CHIP技术检测肿瘤相关基因(P15、P16、HOX．a9和PTEN)的甲基化和乙酰化修饰与基因表达的改变。2．分别采用甲基化芯片(MDIP—chip)和启动子芯片(CHIP—DSL)，从全基因组水平分析IB-arrestinl调控K562细胞表观遗传修饰改变。3．检测在13-arrestinl调控下，CMLK562细胞的特征Bcr／Abl融合基因的甲基化、乙酰化和表达改变。结果1．与对照组相比，CMLK562细胞中敲除13-arrestinl后，抑癌基因P15、

3、P16和Pten发生低甲基化，超乙酰化，表达水平上调；而癌基因HOX．a9的甲基化水平升高，乙酰化水平降低，表达水平下调。2．MDIP-chip甲基化芯片结果显示CMLK562细胞13-arrestinl敲除后，全基因组整体甲基化水平升高，多数基因发生了超甲基化。启动子区CpG岛甲基化修饰差异易发生在1、4、13、14、19号和X染色体。3．CHIP—DSL启动子芯片结果显示13-arrestinl调节CMLK562细胞1316个与组蛋白H4结合的基因乙酰化，这些乙酰化修饰改变对应有CpG岛及转录因子(TF)改变。发生乙酰化修饰的基因与MAPK信号通路的激活有关。甲基化

4、和乙酰化芯片联合分析发现，CMLK562细胞13-arrestinl敲除后，细胞结构相关基因的甲基化及乙酰化修饰最易发生改变。4．CMLK562细胞fl-arrestinl敲除后，其标志Bcr／Abl融合基因的甲基化水平升高，乙酰化水平降低，表达下调。结论13-arrestinl在CML中从全基因组水平调控基因的甲基化和乙酰化，促进CML增殖，特别影响其标志融合基因Bcr／Abl的表观遗传学变化，寻找到[3-arrestinl调控CML增殖的表观遗传机制与分子靶点与依据。关键词：13-arrestinl，CML，细胞增殖，表观遗传学，芯片4BIAlu迎sTINlREGU

5、LATESCHRONICMYELOIDLEUKEMIACELLPROLIFERATION：INANEPIGENETICGENOME．．WIDEWAYObjectiveABSTRACT0ure砌ierstudiesdem。nstratedthatp-arrestin1wassi印i丘callⅡyeleVatedillCMLcells，anditpromotesCMLK562cellspr01i蛔tion．Here，weilul。VatiVeduseMDIP—chipandCHIP．DSLinaIl印igeneticGen。me-Widewayt。deftnetheepig

6、eneticmechaIlisminD．aI]res血1inducedCMLproliferation．Methods1·InK562andprimaryCMLcellswhichwere仃eatedwimp。黼stinl-siRNAlentivirusparticlesrespectively，wemeasuredHOx．a9．PTEN，P15a11dP16expressionlevels，methylativechallgea11dgeneacetylationalterationbyreal-timeRT-PCR，MethylationspecificPCR(MS

7、PlanQchromatinimmunoprecipitation(CHIP)respectively．2·WeusedMDIP—ChipandCHIP．DSLtope哟咖alldanalyzemealteratlOnmethylationprofileandacetylationprofileinK562cellsre星阻latesbyp。arrestinlinanGenome—Wideway．3．WeanalysisthefusiongeneBcr／Ablmethylativea11dacetylativechangesregulat