nsa2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中表达的时相性和定位研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文NSA2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中表达的时相性和定位研究姓名：付鹏申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：彭惠201205重庆医科大学硕士研宄生学位论文NSA2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中表达的时相性和定位研究摘要目的：(1)建立小鼠脉络膜新生血管(choroidalneovascularization，CNV)动物模型；(2)采用RT-PCR、Westernblot和免疫荧光染色技术对NSA2(Nopseven．associated2)在C57BL／6J小鼠CNV动物模型眼组织中的表达情况进行研究，以期为探讨湿性AMD

2、的发病机制提供新的实验依据和理论依据。方法：(1)采用532nm氩激光诱导C57BL／6J小鼠CNV动物模型；(2)取光凝后14d组小鼠眼做脉络膜铺片，用CD31抗体标记血管内皮细胞的方法对CNV模型进行鉴定；(3)采用RT-PCR和Westernblotting方法检测正常对照组和光凝后1d、3d、5d、7d和14d组小鼠CNV中NSA2mRNA和蛋白的表达变化情况进行研究，得出光凝后不同时间点NSA2在CNV模型鼠眼组织中表达的时间变化规律；(4)取光凝后7d组小鼠眼球做冰冻切片，用免疫荧光染色方法对NSA2蛋白在CNV模型鼠眼组织中的表达进行定位研究。结果

3、：(1)在本课题中，我们用532nm氩激光成功稳定的诱导出了C57BL／6J小鼠CNV动物模型，能满足该课题中所有实验的需要。(2)PCR结果显示NSA2mRNA在正常成年C57BL／6J小鼠视网膜一脉络膜一巩膜复合物中弱表达。视网膜光凝后，NSA2mRNA在CNV4重庆医科大学硕士研究生学位论文模型眼的视网膜一脉络膜一巩膜复合物中的表达有明显的时间变化规律，光凝后ldNSA2的表达开始上调，l～3d逐渐增强，3d达高峰，之后其表达逐渐减弱。其中，光凝后1d、3d、5d、7d组NSA2mRNA的表达明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P

4、d组NSA2mRNA的表达与正常对照组相比无统计学意义(P>O．05)；光凝后3d组NSA2mRNA的表达量明显高于其余各组，差别有统计学意义(P<0．05)。(3)Westernblot结果显示，NSA2蛋白在正常成年C57BL／6J小鼠视网膜一脉络膜一巩膜复合物中呈弱表达。光凝后1dNSA2蛋白的表达开始上调，3d达高峰，之后逐渐下降，14d组NSA2蛋白的表达与正常组相比仍有明显差异(P<0．05)；光凝后3d组和5d组NSA2蛋白的表达量明显高于其余各组，差异明显(PO．05)。(4)免疫荧光染色

5、结果显示NSA2蛋白在正常小鼠视网膜外丛状层有较强表达；在光凝后7d组CNV模型鼠眼组织中，除了在视网膜外丛状层中NSA2蛋白呈高表达外，在组织增生活跃的CNV形成区域也可检测到较强的NSA2蛋白表达，差异有统计学意义(P

6、HOROIDALNEOVASCULARIZATIONMODELINMICEINDUCEDBYLASERABSTRACTobjec帆e：(1)Toestablishchoroidalneovascularizationanimalmodelinmice．(2)UsingRT-PCR，WesternblottingandimmunofluorescencestainingtechniquestostudytheexpressionofNopseven-associated2ineyetissuesofchoroidalneovascularizationmodeli

7、nC57BL／6Jmice．SoastoprovidenewexprimentalandtheoreticalbasisforexplorationofthepathogenesisofwetAMDMethods：(1)The532nmargonlaserwereusedtoinduceCNVmodelinC57BL／6Jmice．(2)TheCNVmodeleyesweretakenat14daysafterphotocoagulationtomakechoroidalspead，andCNVmodelswereidentifiedbythemethodofC

8、D31antibodyl