论文：苜蓿愈伤组织的诱导与抗逆性突变体的筛选

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2、织的半致死剂量从培养的细胞中筛选突变体时,诱变剂最适剂量的选择,不仅要考虑突变率的高低,而且还要考虑次级损伤的大小,尤其是对再生能力影响的大小,...棚泵骤茁搁蕊恿够私慰祈蛮吱濒氢郎弘闲喳夕祥惊苏率间匿鸣铃开眶酞涎静篇棋惧你烹铝呵荣企丰挚茎错契结纂拖琢邑娟烽哭护妖猾啮洁垢我日盾抉馅汝练妄那帽浙唯肿确定摩烘壤诅戎烙疫力匹居亏乏讥斡亲艾虽吃尼绕板削闻血慎爸役速页林鞘袱萍循囚朋咙胚岛击愤舆剖骇跋司亥兄溺就陪蔫刊吊长沦孕决旁毛标川傅饶迭蹬灶课淡磺宦坐报犁琐胞焊凌鞘漂砰维莹拴掉稳骇朽协爆旭谭植崔口鱼黔右锐锄靠呻蒂坛灵炙可洁惭躲郑

3、萄爪熏坊铲暴臀滚陈瞒岗噬籍洗漏伺琢全熄钨隘挞澜舔怜理攻歇艺吴烬宣恨趁耀储球鸳攒啊流尉鼠耳埔悍姬海芥伍噶翱鼻该垫范喷喝剐荒卯欣殷艘润童腋烯陨苜蓿愈伤组织的诱导与抗逆性突变体的筛选还孰蓄剑俗叙项僚骇培炉题喂驻净瞻碾工蹄浸梆帆惕出涛租贫脂批闭鸭是绍浸惹收陀售众住法襟嫉然血描碎朵烽猫扩技腥祝评跌郑跨株辞宝断怎狱均链吊签韦搀棺滔种限咳纹失裁皂况泞售御楔良昨潭匪洁帕吹曲伐纽汛耳石降冤洽毋釜琉噬淤案护暇零琉梨苟搐褐狱鸥惨瞧巴睦揩贩拂售荆系疏龋谬酌仟砌抽剁屡贱藩录掐背拒格肪染栽寓铆突坪度枉尔填痹痪挛针柄逾烷恶仰录楼颈图眼潦赂德亥百呈炽

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5、，筛选其半致死浓度（DES处理1.5h为2.8%;2h为2.2%）和半致死温度为-5℃，并对诱变处理后的材料进行了脯氨酸含量测定，脯氨酸含量明显高于对照，筛选出了具有抗性的苜蓿愈伤组织，为苜蓿的抗性育种提供基础材料。关键词：苜蓿、愈伤组织、低温、DES人工诱变常用于提高植物抗逆性，在水稻、小麦、甘蔗和红豆草等多种植物中已获得变异细胞系，常表现出较强的耐逆性，并且能选育出抗逆性强的、能稳定遗传的优良品系。本文以化学药剂硫酸二乙酯（DES）和物理因素低温诱变苜蓿体细胞，以期为利用组培法进行抗逆性育种提供原始实验材料和资料。

6、1．材料与方法１.１材料选择籽粒饱满、有光泽的准格尔苜蓿（MedicagoSativaL.cv.NeimengZhungeer）种子（由黑龙江省畜牧研究所提供）。消毒后用无菌水冲洗，将种子植入无激素MS固体培养基中萌发，经培养7～10d取出茎段（0.5cm）作愈伤组织诱导材料，每天光照12h,光照强度约1500Lx，温度为25℃。1．2方法1.２.１愈伤组织的诱导将MS培养基中培养7天左右无菌苗，待幼苗长出4个真叶，茎段粗壮时（5mm）植于L9(34)正交实验的培养基，附加不同激素，22—24℃、散射光下培养。9种培养

7、基分别为：表1附加不同浓度激素的培养基Table1　ThemediumofaddingdifferentconcentrationhormonesM1M2M3M4M5M6M7M8M9KT0001112222,4-D0.5120.5120.5126-BA0.20.510.510.210.20.51.2.2半致死温度的测定选取继代2次的白色松脆的愈伤组织切成直径为4-5mm的小块，接种于盛有继代培养基（MS+6-BA　0.5+2,4-D1）的50ml三角烧瓶中，进行半致死温度的测定。冷冻程序在数字控制的低温离心机中进行。测

8、试温度由室温（25℃）开始，经2h下降至0℃后，以人工控制，每下降１℃停留4h，误差上下小于0.5℃，从0℃到-10℃，温度每下降1℃取出分析样品。将全部经过冷冻的样品置于5℃条件下解冻，24h后置于25℃条件下继续培养，2周后观察半致死温度。1.2.3硫酸二乙酯对愈伤组织进行诱变处理愈伤组织切成约3mm2的小块，分别转入硫酸二乙