应用γ-h2ax分析技术评价工频磁场对不同细胞dna双链断裂的影响

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1、浙江大学硕士学位论文应用γ--H2AX分析技术评价工频磁场对不同细胞DNA双链断裂的影响姓名：吕烨申请学位级别：硕士专业：劳动卫生与环境卫生学指导教师：曾群力201206浙江大学硕：{：学位论文中文摘要应用丫H2AX分析技术评价工频磁场对不同细胞DNA双链断裂的影响浙江大学医学院09级硕士研究生导师劳动卫生与环境卫生学吕烨曾群力教授中文摘要目的工频磁场是频率为50Hz的极低频磁场，随着人们接触频率及强度的提高，工频磁场的生物学效应引起了研究者的极大关注，有关工频磁场对细胞DNA损伤修复的影响成为评价其健康风险的关键事件之一，但迄今为止有关其遗传损伤效应的研究报道尚无

2、确切定论．本研究采用DNA双链断裂的早期敏感指标_吖H2AX，初步评价了工频磁场不同辐照强度和时间对三种不同系统或器官来源细胞的DNA损伤效应，以期为工频磁场敏感细胞的筛选及其进一步的生物学效应研究奠定基础．方法将人羊膜上皮细胞(FL)、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)以及人皮肤成纤维细胞(HSF)分别暴露于50Hz，O．4mT、lmT和2mT工频磁场15min、lh和24h后，采用丫H2AX免疫荧光法和免疫印迹法分别检测了细胞内DNA双链断裂和YH2AX表达情况．每个强度和时间点分别设置一一对应假暴露组，同时采用0．5pM或lpM4NQO处理lh作为阳性对照组．其中

3、，丫H2AX免疫荧光实验采用平均焦点数、焦点阳性细胞率以及焦点分段分布率作为DNA损伤程度的评价指标．实验采用双盲，每组实验重复3～5次．结果yH2AX免疫荧光法和免疫印迹法结果显示，工频磁场各暴露组与一一对应假¨I浙江大学硕士学位论文中文摘要暴露组相比，平均焦点数、焦点阳性细胞率、丫H2AX蛋白表达量均没有显著性差异(P>O．05)，焦点分段分布率在个别强度或时间点上有差异(P

4、noftheef．fects0fpowerfrequencymagneticfieldsondif．ferentce¨linesbyusing丫H2AXasamolecularmarkerofDNAdouble—strandbreaI‘sMajoroccupationalandEnvironmentalHealthMS．Cand沁ateLvYeSuperVisorProf奄ssorZengQunliAbstractBacI‘gm岫dsPo、^惯雠quencyma印eticfields(PFMF)refert0tlleeX仃emelylow舭quencyelec们ma

5、驴eticfields(ELFMF)晰thfrequencyof50Hz．T11ebio-e胝tSofPFMFhavec鲫sed淅depublicconcemoVern他托centyea瑙，wmchmal【et11egeneticea’ects鹤∞ssingofPFMFexposu他bc=c锄e锄impon锄t觚durgenteventillpublichealtll．But啪tilnow'researches∞龇genetice腩ctsofPn肛眦inconsistent锄dcon仃oversialiIl“sStudy．Wecval删edtlleDNAd锄ageo

6、fthreedi腩rentt”esofcellsexposedt0PFMFatdi岱暑rentinte船ities锄dexposu陀times，陀spectiVely'by璐ing觚e砌y锄d∞nsitivemolecul盯marke吖H2AX，intl圮pu印o∞ofselectingthe辩nsitivecellsofPFMF柚dinveStigatingtlleir如nherbiolo舀calefrects．MethodsHum锄觚mion印itllelial(FL)cellS'h啪觚啪biIicalve访endotllelial(HUVEC)cells锄dh

7、啪觚sbnfibrobl嬲t(HSF)cellswe糟exposedto50HzPFMFatintensityofO．4mT'lmT锄d2mTfor15minutes，lhour锄d24hourS，陀spectiVely．Me锄While，cellsf．0rpOsitivecon仃olwe他eXp0∞dto0．50rlmicromole4．m钾Dquinoline·l—oxideforlhour．ARer仃eatments，cells、Ⅳe陀su场ectedto丫H2AX舭ifomation锄alysisby丫H2AXi姗蚰onuo陀scence．Theme锄n