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1、存档日期：2011年06月存档编号：本科生毕业论文（设计）论文题目：中度嗜盐菌Vibriosp.K1-L一种噬菌体的分离、鉴定姓名：院系：生命科学学院专业：生物技术年级、班组：指导教师：徐州师范大学生命科学学院印制21中度嗜盐菌Vibriosp.K1-L一种噬菌体的分离、鉴定摘要：用从山西运城盐湖水样中分离到的一株中度嗜盐菌Vibriosp.K1-L做为指示菌筛选从同处水样中的噬菌体，将获得的其中一种命名为AD的噬菌体。我们从生理和生化角度对其做了研究；对噬菌体基因组以及结构蛋白做了研究；用扫描电镜观察到了噬菌体结合到指示菌表面的现象。关键
2、词：噬菌体；盐湖；中度嗜盐菌IsolationandCharacteraztionofaPhageinfectingmoderatelyhalophilicVibriosp.K1-LYoukejiSupervisor:WangZiyuan(SchoolofLifeSciences,XuzhouNormalUniversity,Xuzhou,Jiangsu,221116,China)Abstract:AmoderatelyhalophilicbacterialstrainVibriosp.K1-L，isolatedfromYunchengSa
3、linewasusedasindicatortoscanthewatersamplefromthesamelocationforphagedetection.Onephage,designatedaswasisolated.Physiologicalandbiochemicalcharacterizationofthisphagewereconducted.TheInvestigationofphagegenomeandstructureproteinswereperformed.Thisphageiscapableofbindingont
4、hesurfaceofindicatorcellsofVibriosp.K1-Landwasclearlydemonstratedbyscanelectronmicrocopy.Keywords:Phages；Saline；moderatehalophiles.目录21引言31材料与方法31.1供试材料31.2配置培养基材料41.3实验器材41.4嗜盐菌噬菌体的获得51.5噬菌体的验证51.6噬菌体的删选及纯化61.7氯仿耐受性试验61.8噬菌体的大量培养71.9噬菌体的过滤及浓缩71.10对噬菌体浓缩液进行SelfinoseTM4B琼脂糖
5、凝胶过滤层析71.11噬菌体DNA的电泳71.12噬菌体蛋白质SDS—PAGE凝胶电泳81.13噬菌体电镜观察82结果与分析92.1噬菌体的确认92.2噬菌体DNA电泳102.3噬菌体蛋白质SDS—PAGE凝胶电泳122.4噬菌体的电镜观察123讨论134结果13致谢14参考文献1421引言噬菌体（bacteriophage,phage）是寄生于细菌、放线菌、真菌等微生物的病毒,体积微小,结构简单,广泛分布于自然界中，凡是有细菌的场所，都可能有相应的噬菌体存在。根据噬菌体与宿主菌的关系，可分为裂解性噬菌体和溶原性噬菌体。前者可在敏感宿主菌内
6、增殖,并使之裂解；后者基因组整合于宿主菌基因组中,成为细菌DNA的一部分,不单独复制。鉴于噬菌体有溶菌作用和严格的宿主特异性,可利用噬菌体作细菌的鉴定和分型,亦可用于检测标本中的未知细菌和防治某些传染病[1][2]。由于噬菌体结构简单、基因数少，是分子生物学和基因工程的良好实验系统。噬菌体自被发现以来,就被作为基因复制及表达调控研究的模型。直到上世纪末，抗生素的滥用而产生耐药菌株和畜禽产品药物残留等问题的日益严重，大量耐药菌株的出现使得抗生素在细菌疾病的治疗上不再那么有效，噬菌体作为抗菌治疗生物制剂的研究才又重新受到人们的关注。目前噬菌体制
7、剂已受到许多国外生物技术公司的重视,噬菌体研究又成为国外科研机构的研究热点之一。噬菌体是在自然界的数量庞大。噬菌体基因本身就是十分重要的生物自然。因此分离筛选研究新的噬菌体是一现十分重要的工作[3]。本实验以山西运城的一株中度嗜盐菌为宿主菌，分离筛选选出特定的噬菌体，为后续研究作准备。1材料与方法1.1供试材料（1）菌种：从盐湖水中分离出的Vibriosp.K1-L嗜盐菌（2）实验用具：玻璃平板，试管，试管架，玻璃烧杯，塑料烧杯，移液管，酒精灯，超净工作台，60℃恒温水浴锅，180℃恒温烘箱，37℃恒温培养箱，液体摇床培养箱，高压灭菌锅等实
8、验器材1.2配置培养基材料（1）配置30%的SaltWater[4]21表130%海水配方Table130%SeawaterRecipe药品用量NaCl240gMgCl.6H2O
