筛选vegf和vegfr高表达的肝癌细胞株及苦参碱的初步干预作用

《筛选vegf和vegfr高表达的肝癌细胞株及苦参碱的初步干预作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号：R965.1；R979.1；R285硕士学位论文筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株及苦参碱的初步干预作用院（系）、所药学院研究生姓名孟祥林学科、专业药理学导师姓名刘明华教授二Ο一二年四月目录筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株及苦参碱的初步干预1作用……………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………31.3前言……………………………………………………………61.4材料与方法……………………………………………………8

2、1.5结果……………………………………………………………221.6讨论……………………………………………………………321.7结论……………………………………………………………371.8参考文献………………………………………………………381.9英汉缩略词对照表……………………………………………412致谢……………………………………………………………423诱导肿瘤细胞凋亡的天然药物研究进展(综述)…………………………………………………………………43附1论文独创性及授权书…………………………………………51附2已发表综述………………………………………

3、……………52筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株及苦参碱的初步干预作用摘要目的：原发性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是血管富集性的肿瘤，其生长及转移和血管生成密切相关，血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是体内一种强有力的促血管生成因子，通过与VEGF受体（VEGFR）结合，引起一系列信号传导，释放各种生长因子和细胞因子，促进内皮细胞的增殖与迁移，直接或间接参与血管生成，在肝癌的发生、发展及预后中具有极其重要的地位。本实验通过筛选VEGF和VEGFR高表达

4、的肝癌细胞株，观察苦参碱等中药有效成分的初步干预作用，旨在构建靶向VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌血管生成的细胞筛选体系，筛选靶向VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌血管生成的药物，为中药现代化及肝癌的药物治疗提供一个新的思路。方法：（1）筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株：培养人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721和Bel-7402，然后采用免疫细胞化学法检测该三种细胞的VEGF及其受体Fit-1、KDR的表达情况，酶联免疫吸附试验法（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）检测细胞培养上清液中V

5、EGF的浓度，逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR：ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction）技术检测细胞中VEGFmRNA的表达，筛选出VEGF和VEGFR均高表达的细胞株；（2）苦参碱等中药有效成分的初步干预作用：用侯选中药有效成分小檗碱、槲皮素和苦参碱分别干预经过上述实验筛选出VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株Bel-7402，采用CCK-8试剂盒(cellcountingkit-8)方法检测细胞增殖情况，计算半抑制浓度（IC50），筛选出作用较强的中药有效成分，进一步采用RT-PCR方法检测该中

6、药有成分干预1Bel-7402后VEGFmRNA的表达。结果：（1）筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株：免疫组化可检测HepG2和Bel-7402细胞均具有VEGF、Flt-1和KDR的表达，而SMMC-7721细胞则只具有VEGF和Flt-1受体的表达，而无KDR受体的表达。ELISA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量Bel-7402表达最多，SMMC-7721最少。RT-PCR方法检测，Bel-7402中VEGFmRNA表达最多，SMMC-7721的细胞培养上清中VEGFmRNA含量最少（t=6.928，F=0.000）。据此，本研究

7、选定VEGF和VEGFR均高表达的肝癌细胞株Bel-7402作为实验用细胞。（2）槲皮素、苦参碱和小檗碱在溶媒DMSO控制在5‰以下的情况下，对Bel-7402细胞均能起到抑制作用，且有随着药物浓度的增高抑制率增强的趋势，通过CurveExpert1.3软件求得小檗碱、槲皮素和苦参碱的IC50分别为：221.12μg/mL、1186.58μg/mL和78.38μg/mL，苦参碱对Bel-7402细胞增殖的抑制作用最强。RT-PCR方法检测结果表明，苦参碱作用于Bel-740248小时后，VEGFmRNA的表达量明显减少，呈现较好的浓度依赖关系。结论：

8、通过免疫组化、ELISA及RT-PCR对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721和Bel-7402的筛选，