水稻灌浆初期高温胁迫下的籽粒全长cdna文库构建

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1、独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在江西农业大学或其它教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名论文使用授权的说明本人完全了解江西农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的

2、复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在——年后解密可适用本授权书。口不保密，本学位论文属于不保密。彳(请在方框内打“√”)学位论文作者亲笔签名指导教师亲笔签日期：逊∑摘要前期研究中，本课题组采用基因差异显示技术和比较蛋白质组学方法获得了与水稻灌浆期应答高温热害有关的54个差异表达基因片段和21个差异表达蛋白，但是54差异表达基因片段和21个差异表达蛋白并非mRNA全长，为获得mRNA全长构建水稻灌浆初期高温胁迫下的籽粒全长e

3、DNA文库。本文以高温胁迫条件和常温对照条件下的水稻籽粒混合样品，利用Clontech公司生产的SMARTPCReDNASynthesisKit反转试剂盒合成双链eDNA；通过分段回收和纯化eDNA后，克隆到T载体并转化大肠杆菌DH5a；通过单克隆挑取和培养，获得了7974个阳性克隆，其中插入目的eDNA片段大于1．0kb的克隆有5074个，占克隆总数的63．6％；插入目的片段小于1．0kb的克隆数为2900个、占克隆总数的36．4％。随机挑取其中34个克隆进行测序，测序结果在Genbank的水稻E

4、ST数据库比对，结果显示插入目的片段大于1．0kb的克隆中，75％为水稻EST数据库中最长的eDNA；同时，比对结果显示，基因OsP0003和OsP0012与籽粒育性相关的ESTs高度同源，基因0妒DD舛、OsP0023、OsP0029和OsP0032与干旱胁迫相关的ESTs。从文库克隆的数量和测序及比对结果可以看出，本文所建文库包含水稻中绝大多数基因表达的eDNA信息，文库质量较好，为进一步获得与水稻灌浆期耐热性相关的差异表达基因和编码差异表达蛋白基因的EST全长奠定了良好的基础。关键词：水稻；灌

5、浆初期；高温胁迫；籽粒；全长eDNA文库AbstractIn011I"previousstudy,54differentexpressinggenefragmentsand21differentdisplayingfunctionalproteinswereidentifiedbycDNA-AFLPgenesdifferentexpressingtechnologyandproteomics，respectively,however，the54differentdisplaygenesand21di

6、fferentdisplayingfunctionalproteinswerenotfulllengthmRNA，InordertogetfullthelengthmRNA，Full-lengthcDNAlibraryconstructionofricepanicleatearlymilkystageunderhightemperaturestress．Thus，inthisstudy,fulllengthcDNAsweresynthesizedbytheSMARTPCRcDNASynthesisK

7、itproducedbyClontechcompany,withthemixedpaniclesofriceunderhightemperaturestressandnormalculturalconditions．Afterrecoveryandpureinsections，fulllengthcDNAwereligatedtoTvectorandtransferredtoDH5a，and7974positivecloneswereobtained．Amongtheclones，thesizeof

8、targetcDNAupto1．0kbwere5074clones，accountto63．6％，andthesizeoftargetcDNAdownto1．0kbwere2900clones，accountto36．4％．Randomlyselected34clonesweresequenced，sequencingresultsinaGenbankESTdatabaseonrice．Accordingtotheresultofrandomsequencingand